SOP-10029-00薄层色谱法操作规程.doc

起草人： 日期： 审 核 人： 日期： 批准人： 日期： 执行日期： 颁发部门：质量部 拷贝号： 变更记载： 制定（变更）原因及目的：新建 修订号 批准日期 执行日期 01 02 分发部门 质 量 部 [ ]份 生 产 部 [ ]份 财 务 部 [ ]份 物 料 部 [ ]份 行政人力资源部 [ ]份 销 售 部 [ ]份 薄层色谱法操作规程 目的：建立薄层色谱法检验的标准操作程序，确保薄层色谱法检验结果的准确性。 适用范围：适用于本公司实验样品的薄层色谱检验。 职责 检验员：严格按检验操作规程进行检验。 QC主管：监督检查执行情况。 定义 薄层色谱法系将供试品溶液点样于薄层板上，经展开、检视后所得的色谱图， 与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用于药品的鉴别或杂质检查的方法玻板除另有规定外用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm、20cm×20cm、5cm×20cm的规格 吸附剂或载体最常用的固定相有硅胶G、硅胶GF、硅胶H和硅胶HF，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F等。其颗粒大小，一般要求粒径为 5～40μm 点样器微量进样器(平头)、毛细管，应能使点样位置正确、集中。 展开显色剂见各品种项下的规定。可采用喷雾显色、浸渍显色或置适宜试剂（如碘、浓氨 水、浓硫酸等）的蒸气中熏蒸显色，用以检出斑点显色装置喷雾显色使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出；浸渍显色可用专用玻璃器皿或用适宜的玻璃缸代替；蒸气熏蒸显色可用双槽玻璃缸或适宜大小的干燥器代替检视装置为装有可见光、短波紫外光（254nm）、长波紫外光（365nm光源及相应滤片的暗箱可附加摄像设备供拍摄色谱用，暗箱内光源应有足够的光照度试药与试液 5%羧甲基纤维素钠溶液称取2—5g羧甲基纤维素钠加1升水煮沸溶解,过滤,静置用时取上清液。 点样 点样器点样于薄层板上一般为圆点点样基线距底边m（高效薄层板一般基线离底边0.8～1.0cm），样点直径为2～4mm（高效薄层板为1～2mm），接触点样时注意勿损伤薄层表面。条带状宽度一般为5～10mm，高效薄层板条带宽度一般为4～8mm，可用专用半自动或自动点样器械喷雾法点样。点间距可视斑点扩散情况以相邻斑点互不干扰为宜，一般为1.0～2.0cm（高效板供试品间隔不小于5mm）。 展开展开缸预先用展开剂饱和可避免边缘效应，如需预饱和，可在缸中加入足够量的展开剂，必要时在壁上贴两条与缸一样高的宽滤纸条，一端浸入展开剂中，密封顶盖，一般保持15?30min，使系统平衡或按各品种项下的规定操作。 将点好供试品的薄层板放入展开缸中，浸入展开剂的深度为距薄层板底边 （切勿将样点浸入展开剂中），密封顶盖，待展开至适宜的展距（如20cm 的薄层板，展距一般为 10～15cm，高效薄层板展距一般为5cm左右），取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测展开可以单向展开，即向一个方向进行；也可以进行双向展开，即先向一个方向展开，取出，待展开剂完全挥发后，将薄层板转动90°，再用原展开剂或另一种展开剂进行展开；亦可多次展开荧光薄层板可用荧光猝灭法；普通薄层板，有色物质可在日光下直接检视无色物质可用物理或化学方法检视。物理方法是检出斑点的荧光颜色及强度；化学方法一般用化学试剂显色后，立即覆盖同样大小的玻璃板，检视。 系统适用性试验 按各品种项下要求对检测方法进行系统适用性试验，检测灵敏度、比移值（R）和分离效能符合规定。系指杂质检查时，供试品溶液中被测物质能被检出的最低量。一般采用对照溶液稀释若干倍的溶液与供试品溶液和对照溶液在规定的色谱条件下，在同一块薄层板上点样、展开、检视，前者应显示清晰的斑点。比移值（R） 系指从基线至展开斑点中心的距离与从基线至展开剂前沿的距离的比值。Rf）的计算公式为： Rf = 鉴别时，可用供试品溶液主斑点与对照品溶液主斑点的比移值进行比较，或用比移值来说明主斑点或杂质斑点的位置。比移值（R）分离效能 鉴别时，对照品与结构相似的药物对照品制成混合对照溶液可采用与同浓度的对照品溶液，在同一块薄层板上点样、展开与检视，供试品溶液所显主斑点的颜色（或荧光）与位置（R）应与对照品溶液的主斑点一致，而且主斑点的大小与颜色的深浅也应大致相同。或采用供试品溶液与对照品溶液等体积混合，应显示单一、紧密的斑点；或选用与供试品化学结构相似的药物对照品与供试品溶液的主斑点比较，两者R应不同或将上述两种溶液等体积混合，应显示两个清晰分离的斑点。可采用杂质对照品法、供试品溶液的自身