水产品中替米考星残留分析方法探讨.docVIP

水产品中替米考星残留分析方法的探讨摘要：替米考星大环内酯类抗生素，在水产养殖中主要用于预防传染疾病或在饲料中作促生长剂。过量或不按停药期的规定使用会造成残留，对人类健康造成威胁。通过多种检测方法，认为液相色谱串联质谱法是适合的方法结合研究成果和作者的实际工作，从前处理（包括提取和净化）和检测两个方面对水产品中替米考星的残留分析方法进行探讨 关键词替米考星(Tilmicosin) 是半合成大环内酯类畜禽专用抗生素，具有很强的抗菌活性，对所有的革兰氏阳性菌和部分革兰氏阴性菌、霉形体、螺旋体等均有抑制作用，尤其是对多种支原体及螺旋体也具有很强的抑制作用[1]，在水产养殖中主要用于预防传染疾病或在饲料中用作促生长剂。 替米考星，分子式为：C46H80N2O13（其结构式见图1），为无色弱碱性化合物，易溶于酸性水溶液和甲醇、乙腈、乙酸乙酯、氯仿、乙醚等极性溶剂，在饱和碳氢溶剂和水中微溶，在干燥状态下相当稳定，在pH 6～8 的水溶液中相对较稳定，但在酸性条件下 (pH4时) 苷键易发生水解。 图1 替米考星结构式 欧盟和日本等明确规定水产品肌肉中替米考星的最大残留量为50μg/kg 。目前国只规定畜禽产品中的替米考星的限量标准，但在水产品中并没有规定其限量，也没有相应的检测方法。国作为水产品生产及出口贸易大国，如不能很好地控制替米考星的残留，不但对人类健康构成严重威胁，还会给水产品的出口贸易造成不必要的困难。因此开展对水产品中替米考星的残留检测，对促进水产品出口和保证动物源性食品安全有积极的意义。 目前，用于替米考星的检测方法有薄层色谱法、核磁共振法、液相色谱法和液相色谱串联质谱法，但这几种方法各有优缺点。 TLC法是用薄层板将样品提取液中被测物展开分离后，测定样品与标准样品吸收光或采用发射光薄层扫描法测定。在2000 版的《中国药典》中，所有相关大环内酯类抗生素物质的检测都使用该法。但在水产品中替米考星的检测上TLC 法有明显的缺点：TLC 影响因素较多，分离能力较差，检测灵敏度较低，不适于药物的微量检测。 NMR 法是一种基于特定原子核在外磁场中吸收了与其裂分能级间能量差相对应的射频场能量而产生共振现象的分析方法。王强等[]用Bruker Avance300 超导核磁共振波谱仪、QNP 探头，在测定温度(探头温度)室温25℃ ，环境相对湿度30% ，脉冲宽度pl=8s ，脉冲延迟时间dl=8s ，扫描次数ns=32 下，用核磁共振方法对替米考星样品进行定量测定，线性实验测得线性回归系数为0.9985 ，重复性实验测得RSD 为0.327% 。NMR 法分析替米考星的缺点是对样品纯度要求较高，只能用在该药品的分析方面。另外，该法灵敏度比较低，一般要用mg 以上的试样作测试，很少作定性分析。定量分析精确度、准确度也较差。 HPLC 法作为现代分析技术的重要手段之一，目前已成为大多数大环内酯类抗生素残留的分析方法。张素梅等[3]建立替米考星残留的HPLC 检测方法。样品用磷酸二氢钾和乙腈提取，SPE 柱净化，选取乙腈-四氢呋喃-磷酸二丁胺-水为流动相，色谱柱色谱柱为Agilent E clipseXDB-C18 反相色谱柱柱，在290nm 波长下进行测定。替米考星在0.02～2.0μg/g 添加范围内，平均回收率为78.90%～85.17% 。张旭东[4]在流动相为水-己腈-四氢呋喃-磷酸丁胺缓冲液，色谱柱为ODS 柱的条件下，对替米考星进行分析。最低检测限为1.7μg ，方法的回收率在99%～101% ，相对标准偏差(RSD) 小于0.5% 。HPLC 法实现了分离速度快，效率高和操作自动化。但该方法所用的流动相复杂，不易掌握配比，而且检测替米考星时定性不够准确，容易受到杂峰的干扰。同时，由于某些大环内酯类抗生素在分子中缺乏特征紫外吸收，如果使用普通的紫外检测器，由于含量较低，HPLC 法将失去灵敏度的优势，因此该法不适于多种药物的同时检测。 LC-MS 法是确证检测类似替米考星这样较高分子量和多官能团残留物的较理想方法。该法具有较高的灵敏度和选择性，对LC 分离度要求不高。特别是基于大气压电喷雾电离接口技术的LC-ESI-MS 能获得较强的替米考星分子离子峰，适宜在SIM (选择离子监测) 模式下进行高灵敏度检测。Masakazu Horie 等采用Lc-ESI-MS 法测定肉和鱼中的残留。药物用偏磷酸-甲醇(64，) 提取，Oasis HLB 固相萃取柱净化。L分离用TSK-gel Super ODS 柱，流动相为醋酸-。该方法在加标0μg/g 时70.14%~93.12% 。检测限为μg/g 。 通过比较发现，薄层色谱法和核磁共振法因检测灵敏度低或周期长，不适于水产品中替米考星的微量检测；高效液相色谱法存在基质干扰大、检出限高