花药和花粉的培养.pptVIP

第五章 花药和花粉培养;花药的培养技术;(1)掌握花药培养和花粉培养的区别； (2)了解花药最佳接种时期； (3)掌握花药培养的大致过程； (4)掌握花粉发育的四种途径； (5)掌握花粉培养的大致过程。 ;第一节 花药和花粉培养技术;花药培养：是将花粉发育至一定阶段的花药接种到人工培养基上进行培养，以诱导其花粉粒改变发育进程，形成花粉胚或愈伤组织进而分化成植株的技术。 花粉培养：是将花粉从花药中分离出来,接种到人工培养基上进行培养，以形成花粉胚或愈伤组织进而分化成植株的过程。 目的：利用花粉染色体数目的单倍性，培育出单倍体植株。;;一、花药和花粉的培养方法;2.花粉发育时期的检测 （1）外部形态观察：找出外部形态，如幼穗的大小、花蕾大小等与花粉发育的关系。 （2）压片染色法：常用染色剂为醋酸洋红。将花药置于载玻片上压碎，加醋酸洋红1~2滴染色，再用显微镜检查。;（二）培养过程 1.花药培养过程 （1）材料预处理：低温冷藏是最常用的方法。 （2）表面灭菌 （3）接种 （4）培养 花粉---愈伤组织---苗 花粉---胚状体---苗 （5）植株的诱导;草莓花药愈伤组织,花药植株;部分花药通过胚状体途径形成小植株;2.花粉培养 花粉培养成苗途径与花药培养比较: 相同点： 胚状体成苗途径、愈伤组织再分化成苗途径 不同点： 花粉培养： 需进行花粉的分离 特殊的花粉诱导培养; ;（2）花粉培养方法 看护培养法 利用花药或花药愈伤组织释放出的活性物质促进花粉小孢子发育。 ;看护培养图解;花粉培养过程;二、培养基;（二）植物生长物质的种类和浓度 细胞分裂素可促进胚状体形成； 生长素可诱导愈伤组织形成。 细胞分裂素与生长素比值高时可诱导愈伤组织分化苗。;（三）蔗糖浓度 较高浓度蔗糖可诱导花粉形成愈伤组织； 较低浓度蔗糖可使愈伤组织分化成苗。 （四）有机附加物 椰子汁、玉米汁、马铃薯汁对提高花粉愈伤组织和胚状体诱导率、促进其生长有良好效果。;三、单倍体植株的染色体加倍;（二）单倍体植株染色体加倍的方法 1.自然加倍 通过花粉细胞核有丝分裂或核融合染色体可自然加倍，从而获得??定数量的纯和二倍体，但随机性强，难以掌握和利用。;2.人工加倍 常用的是化学诱变法，常用诱变剂为秋水仙素。 （1）小苗浸泡：将诱导产生的幼小花粉植株从培养基取出，在无菌条件下浸泡在一定浓度的秋水仙素溶液中，一定时间后转移到新鲜培养基上继续培养，在烟草中一般使用0.4%秋水仙素溶液，过滤灭菌进行处理。;（2）茎尖处理 将秋水仙素调和到羊毛脂中，然后将羊毛脂涂在单倍体植株的顶芽或腋芽上，诱导分生组织细胞加倍；也可用秋水仙素水溶液，将蘸满溶液的棉球放在顶芽或腋芽上。这两种办法均需加盖塑料以防蒸发。;（3）培养基处理 将秋水仙素直接加入到培养基中，使培养的单倍体细胞加倍，或者使来自单倍体植株的外植体在培养过程中加倍。;3.从愈伤组织再生 将单倍体植物（孢子体）的茎段、叶柄、根茎切下，置适宜的培养基上使之发生愈伤组织，反复继代后再将愈伤组织转移到分化培养基上，即可获得较多二倍体植株。;第二节 花药和花粉培养的应用;一、单倍体植物在育种中的作用;大大缩短育种周期;例子： 二倍体供体植株基因型为AaBb，若要从后代中选择基因为AAbb的纯合单株 常规方法： AAbb出现的概率为1/16，并且不能将AAbb与Aabb、aAbb区分开。 ;例子： 二倍体供体植株基因型为AaBb，若要从后代中选择基因为AAbb的纯合单株 单倍体方法： AAbb出现的概率为1/4。;二、我国单倍体育种的成就;本章小结;Thank You !