试验五叶绿体的分离与荧光观察.PPT

实验五　叶绿体的分离与荧光观察 一. 实验目的 1 ．通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理与方法；了解差速离心 Differential centrifugation特点与用途 2 ．了解菠菜叶绿体的形态、分布与数量。 二　实验原理 采用差速离心分离细胞器； 沉降顺序：核——线粒体——溶酶体与过氧化物酶体——内质网与高基体——核蛋白体； 叶绿体具有荧光现象，可利用荧光显微镜观察。 菠菜叶富含叶绿体，可采用徒手切片观察 其形态和分布； 三、实验用品 1．器材 离心机、研钵或组织捣碎机、显微镜、天平、离心管、纱布、烧杯、量筒、滴管、载玻片、盖玻片 2．材料 新鲜菠菜叶 3．试剂 0.35mol/L氯化钠溶液 四、实验方法 （一）叶绿体的分离与观察 取新嫩菠菜叶，洗净檫干、去梗，称30g，分批放入研钵。 加入0.35mol/L氯化钠溶液， 共150ml，研磨，制成匀浆； 将匀浆用６层纱布过滤于烧杯中； 取滤液４ml在1000r/min离心２min，取上清； 上清液3000r/min离心５min．去上清，沉淀即为叶绿体； 加0.35mol/L氯化钠溶液悬浮沉淀； 取叶绿体悬液１滴于载玻片上，加盖片： 普通光镜下观察；荧光显微镜下演示 （二）菠菜叶徒手切片观察 新嫩菠菜叶斜切面１片，0.35mol/L氯化钠溶液１滴；加盖片轻压：光镜下观察叶绿体在表皮细胞和保卫细胞中的分布；