超高效液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱法检测动物组织中的20种β2.pdf

超高效液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱法检测动物组织中的 20 种β2-受体激动剂的残留 贾晓飞 蔡增轩 潘红锋 任一平 浙江省疾病预防控制中心 中国浙江省杭州 310009 摘要：本文应用超高效液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱联用技术UPLC-MS/MS,在正离子多反 应监测（MRM）模式下对动物组织中 20 种β2-受体激动剂残留进行检测。本文着重对动物器官 组织中 20 种β2-受体激动剂的净化方法及液相方法与质谱方法等相关检测参数进行了最佳化 研究。样品经酶解、高氯酸沉淀蛋白，MCX柱净化和富集。选择salbutamol - d3，clenbuterol - d9，ractopamine - d9 三个经同位素标记的β2-受体激动剂为内标，通过Waters ACQUITY UPLCTM BEH Shield RP C18 色谱柱分离，以乙腈和含 0.1％甲酸的水溶液为流动相，进行梯度 洗脱，采用MRM方式测定。该方法的检出限 0.01～0.43 μg/kg，最低定量限为 0.04～1.43 μg/kg。添加水平为0.5,1.0,2.0 μg/kg时，20种β2-受体激动剂的加标回收率为70.5～116.4 %，相对标准偏差为 2.9～19.0 %。该方法具有灵敏度高、回收率好，能够快速准确地对动物 组织中 20 种β2-受体激动剂进行检测。 关键词 超高效液相色谱- 串联质谱法，β2-受体激动剂，动物器官组织 β-受体激动剂，是一类人工合成苯乙胺类药物，具有促进肌肉生长，减少脂肪沉积等作 2 用，因此也有一些饲料生产商与家畜生产者违禁使用该药品于家畜养殖中。由于β2-受体激动 剂作用效应较强，并且在动物体内有较长的残留时间和短期内产生较大的残留量，特别是内 脏中蓄积残留，通过食物链进入人体，会使一些易感人群产生较明显的中毒症状，严重危害 人类健康，欧美等国立法禁止在畜禽生产上使用，我国农业部也于 1997 年作出相同的规定。 [1-4] 目前，对β-受体激动剂的分析方法有气/质联用分析法（GC/MS ） 、高效液相色谱法（HPLC ） 2 [5-6] [7] [8-11] 、酶联免疫法（ELISA ） 、液质联用法 等。酶联免疫法虽然具有检测灵敏度高、检出 限低、快速等特点，但存在假阳性的问题，不能进行定量分析，并不适用所有的β2-受体激动 剂。GC-MS虽然灵敏度和特异性都很高，可以满足残留分析的要求，但衍生过程繁琐，对于 多组分的β2-受体激动剂由于其之间结构上的差异而受到一次衍生、分离和分析的限制。HPLC 虽然能直接分析，但多数检测器灵敏度偏低，无法同时进行 20 种β2-受体激动剂高灵敏度测 定，并且由于存在较多的光谱杂质干扰，而导致无法进行确证。近年来，LC/MS正迅速地成 为测定β2-受体激动剂的有效的定性和定量手段。邵兵等应用HLB和MCX两次SPE纯化和 UPLC-MS/MS对动物组织中的 9 种β2-受体激动剂进行了方法学的研究[12]，为本方法的研究提 供了极为有价值的信息。本方法建立了样品经酶解、高氯酸沉淀蛋白，MCX柱净化和富集，选 择salbutamol - d3，clenbuterol - d9，ractopamine - d9 为内标，经Waters ACQUITY UPLCTM BEH Shield RP 18 柱超高效液相色谱柱分离，多通道MRM质谱检测 20 种β2-受体激动剂残留 的多组分快速定量方法。具有前处理简单，选择性和灵敏度高，更具有实用性。 材料和方法 1.1 仪器与试剂 TM ® TM 1.1.1 仪器 ACQUITY 超高效液相色谱仪(Waters公司)、Micromass -Quattro Ultima Pt 质谱仪 (Waters公司)，离心机(AllegraTM X-22R型，Beckman公司)， Oasis MCX固相萃取(SPE)