分蘖洋葱查尔酮异构酶基因的克隆及表达载体的构建.pdf

生物技术通报 · 研 究 报 告 · BIoTECHNoLoGY BULLETlN 2014年第 1O期 分蘖洋葱查尔酮异构酶基因的克隆及表达载体的构建 刘丹 吴凤芝 (东北农业大学园艺学院，哈尔滨 150030) 摘 要 ： 旨在得到分蘖洋葱查尔酮异构酶基因，探 明该基 因的功能。克隆查尔酮异构酶基 因并构建 了其超表达和干扰载体 ， 以期得到用于研究查尔酮异构酶基因功能的表达载体。从分蘖洋葱叶片中克隆得到查尔酮异构酶基 因cDNA全长743bp，GenBank 登录号为KJ489062。结果显示，该基 因633bp的开放读码框编码 210个氨基酸的多肽序列。将PCR扩增克隆得到的分蘖洋葱查 尔酮异构酶基因片段连接到干扰栽体 pCAMBIA1301和超表达栽体 SOL2095中，成功构建了35S启动子控制的植物表达双元栽体 pCAMB1A1301-CH／和 SOL2095一CH／。 关键词 ： 分蘖洋葱 查尔酮异构酶 基 因克隆 载体构建 CloningofChalconeIsomeraseGenefrom PotatoOnionandPlant ExpressionVectorConstruction LiuDan WuFengzhi (HorticultureCollege，NortheastAgriculturalUniversity，Harbin150030) Abstract： Tocloneandanalysethefunctionofthepotatoonionchalconeisomerasegene，wegeneratedCHIover—expressionconstruct andRNAiconstruct．Full-lengthCHIgeneis743bp，andtheGenBankaccessionnumberisKJ489062．Resultsshowedthat，CHIgeneopen readingframecontain633bp，translatinginto210aminoacids．Full—lengthCHIgeneandthefragmentofCHIgeneforsilencingwereamplified byPCRoncomplementaryDNA (eDNA)，thenPCRfragmentwastransferredtothebinaryvectorunderthecontrolof35S． Keywords： Potatoonion Chalconeisomerase Genecloning Vetorconsturction 黄酮类化合物是多酚类次生代谢物质，由苯丙 响大，同时也会影响到黄酮类代谢产物的合成。 烷代谢途径合成。黄酮类化合物具有很多重要功能， 分蘖洋葱 (Alliumcepavar．agrogatumDon．)俗 如紫外防护 、抗病原微生物 、参与花色形成 、植物 称毛葱，为百合科葱属草本植物。其适应性强，高 的育性及植物与微生物相互识别协作等。查尔酮异 产、耐贮、供应期长，是黑龙江省传统的优 良农家 构酶 (Chalconeisomerase，CHI)也称查尔酮黄酮异 品种 ，在广大农村多有种植。其鳞茎中含有特殊辛 构酶 (Chalc0neflavanoneisomerase)…，是类 黄酮 辣味的挥发性硫化物，具有杀菌消毒作用，亦是类 物质合成的关键酶之一_2J，可催化分子内环化反应， 黄酮含量较高的蔬菜种类之一，生产中常被用于问、 使双环的查尔酮转化为有生物学活性的三环 (2S)． 混、套作，用来减轻连作障碍问题 。。近年来的研 黄烷酮。CH／蛋 白以单体的形式普遍存在于大多数 究表明，基因表达产物可通过根系分泌物进入土壤 植物中，分子量 因植物组织而异 ，约 24—29kD 。 中，进而对土壤生态系统