A型口蹄疫病毒VP1蛋白间接ELISA检测方法的建立.pdfVIP

~比~ ~ ð且 2014 ， 23 (1) : 30-35 Acta Agγicult乱γae Boγeali-occidentalis Sinica doi: 10.7606/j.issn.1004-1389.2014.0L006 网络出版时间:2014-01-21 网络出版地址:/kcms/ doi/10. 7606/j. issn. 1004-1389. 2014. 0 1. 006. html A 塑口蹄痊病毒 VPl 蛋白间接ELISA 检测方法的建立 卢清侠l ，刘 畅1 ， 2 ，郭官鹏飞邢广旭1 ，刘运超1 ，邓瑞广1 ，张改平l (1.河南省农业科学院，农业部动物免疫学重点开放实验室/河南省动物免疫学重点实验室，郑州 450002; 2. 河南农业大学牧医工程学院，郑州 450002) 摘 要 以原核表达经纯化复性制备的 A 型口蹄疫病毒(FMDV)VP1 蛋白代替传统病毒抗原包被，建立快 速、安全、有效的 A 型 FMDV 抗体 ELISA 检测方法。对前期制备的 A 型 VP1 蛋白进行 Western-Blot 检测， 结果表明，VP1 蛋白能够特异性识别 A 型 FMDV 阳性牛血清，可作为检测抗原建立检测 A 型 FMDV 抗体的 方法。以最佳质量浓度 1 mg/L VP1 蛋白为检测抗原，方阵滴定法确定最佳检测血清稀释度为 1 : 50[V( 血 清) : VC封闭液汀，最佳的酶标二抗稀释度为 1 : 2 OOO[V( 酶标二抗) : V( 封闭液汀，建立 A 型 FMDV 抗体 ELISA 检测方法。该方法的敏感性为 94.32% ，特异性为 99.09% ，批内与批间重复试验变异系数均小于 8% 。采用该方法检测 201 份临床血清，与液相阻断 ELISA 试剂盒的符合率达 92.54% 。研制的 VP1-ELISA 试剂盒特异、敏感、稳定、操作简便，可用来监控 A 型口蹄疫抗体水平。 关键词 A 型口蹄疫病毒;VP1 蛋白;间接 ELISA 中图分类号 S852. 65 文献标志码 A 文章编号 1004-1389(2014)01-0030-06 Establishment of Indirect ELISA Diagnose ßased on the VPl Protein of Foot and Mouth Disease Virus Serotype A 2 LU Qingxia , LIU Chang1,2 ,GUO Guanpeng , XING Guangxu , 1 1 LIU Yunchao ,DENG Ruiguang and ZHANG Gaiping (1. Key Laboratory of Animal Immunology of the Ministry of Agriculture/Henan Provincial Key Laboratory of Animal Immunology , Henan Academy of Agricultural Sciences , Zhengzhou 450002 , China; 2. College of Veterinary Medicine and Animal Science , Henan Agricultural University , Zhengzhou 450002 , China)