NS1基因主要抗原区的可溶性表达及其Dot-ELISA检测方法的建立.pdfVIP

Vo 1. 43 No.6 第 43 卷第6 期 西北农林科技大学学报(自然科学版) 2015 年 6 月 Journal of Northwest AßιF UniversilyCNat. Sci. Ed.) ]un. 2015 网络出版时间:2015-05-11 15: 02 DOI: 10. 13207/j. cnki. jnwafu. 2015. 06. 004 网络出版地址:/kcms/detail/ 6 1. 1390.S.2015051 1. 1502.004.html NSl 基因主要抗原区的可溶性表达及其 Dot-ELISA 检测方法的建立 赵朴i ， 2 ，苏红辽3 ，刘兴友l ， 2 ，赵坤l ， 2 ，胡建和1 ， 2 ， 王三虎1 ， 2 ，姚四新1 ， 2 ，郑玉妹1，2 (l河南科技学院动物科学学院，河南新乡 453003;2 动物疫病和残留物防控河南省高校工程技术研究中心，河南新乡 453003; 3 滑县动物卫生监督所，河南安阳 456400) f摘 要] [目的】可溶性表达猪流感病毒CSIV) NSl 基因主要抗原区CNS1) 蛋白，获得具有良好抗原性的 NS1 蛋白，并初步建立检测 NSl 抗体的斑点酶联吸附试验CDot-EUSA) 方法，为鉴别诊断猪流感病毒感染猪与疫苗 免疫猪奠定基础。【方法】以质粒 pET28a-NSl 为模板，PCR 扩增 NSl 基因抗原性较好的区段 NS1 ， 用 EcoR 1 和 Xho 1 双目每切后插入 pET-32aC 斗) ，构建 pET3Za-NSl ，经 PCR、 EcoRI 和 Xho 1 双酶切及 DNA 测序鉴定后，转化大 肠杆菌 Rosetta ，用 IPTG 诱导表达，纯化 NS1并免疫家兔制备多克隆血清，对其进行 SDS、 Western blotting 检 测和免疫荧光分析，并以纯化的 NS1 作为包被抗原初步建立 Dot-ELISA 检测方法。 E结果1 PCR 扩增获得了长约 250 bp 的 H3N2 SIV NS1片段;成功构建了重组载体 pET32且一NS1 ， SDS和 Western blotting 检测结果显示， 融合蛋白 NS1 大小约 34 ku ，该蛋白可溶，能与感染 SIV 的猪血清特异性反应，并且用纯化蛋向 NS1制备的多克隆血 清能识别 293T 细胞中表达的 NSl，建立的 Dot-ELlSA 检测方法可鉴别猪流感病毒感染猪与疫苗免疫猪。 E结论】实 现了 H3N2 SIV NS1蛋白的可溶性表达，表达产物具有良好的抗原性，以 NSl 作为包被抗原，建立了检测 NSl 抗体 的 Dot-ELISA 方法。 [关键词] 猪流感病毒;非结构蛋白 1 ;主要抗原区域;可溶性表达;斑点酶联免疫吸附试验 [中图分类号] S852. 65 1 [文献标志码] A [文章编号] 1671-9387(2015)06-0035-06 Soluble expression of main antigen region of NS 1 gene from H3N2 SIV in Henan and development of Dot-E Ll SA detection method 1 3 1 ZHAO PU ,2 , SU Hong-liao , LIU Xing-you ,2 ,