SOCS1在人骨髓间充质干细胞中的表达以及稳定表达SOCS1间充质干细胞株的建立.pdfVIP

562 I~beled Immunoassays Clin Med.Jun. 2015. Vol. 22 .No. 6 ·方法研究· SOCSl 在人骨髓闰充质干细胞中的表达以及 稳定表达 SOCSl 间充质干细胞株的建立 邹瑞丰l 气谢静仪3 (1.中山大学干细胞与组织工程中心，广东广州 51∞80; 2. 暨南大学第二临床医学院深圳市人民医院龙华分院肾内科， 广东深圳 518020;3. 暨南大学第二临床医学院深圳市人民医院龙华分院风湿免疫科，广东深圳 518020) 摘要:目的 探讨不同炎性因子剌激下细胞因子信号转导抑制分子-1 (suppressor of cytokine signalingl •SOCSl )在人骨髓间 充质干细胞(mese时hymal stem cells ,MSCs) 中的表达情况，并研究稳定表达 SOCSl 的 MSCs 细胞株的建立方法。方法 用 SOCSl 相关炎性因子刺激剂处理24 小时后裂解MSCs ,Westen Blot 检测各组细胞SOCSl 的表达。通过Gateway 技术，构建 出表达 SOCSI 基因的载体质粒 pFinaνPGK- puro- EFlα- SOCS 1-IRES- EGFP ，将其与包装质粒共转染 293盯细胞产生慢病 毒，通过多次感染将载体导人人骨髓间充质干细胞，流式细胞术筛选出稳定表达 SOCSI 的人骨髓间充质干细胞，并用 Westen Blotting 、流式细胞术、成骨成脂肪诱导分化来鉴定。结果 SOCSl 蛋白在 IFN-γ、 Pam3CSK4 、 Poly ( 1: C) 、 LPS 和 OON 2∞6 刺激的 MSCs 中表达升高(PO.OI) 。表达载体包装出的病毒感染后的 MSCs 中 SOCSI 蛋白水平提高，流式细 胞检测表达( 95ì毛 )C029 、 CD44、CD73 、 CD90 、 C0105 、 COI俑，不表达( 2% )C034 和 C045 ，在相应诱导剂诱导下可分化 为成骨细胞和脂肪细胞。结论 多种炎性因子能诱导 MSCs 内 SOCSl 表达升高，说明 SOCSl 可能参与了 MSCs 的免疫调 节功能;成功建立了稳定表达 SOCSI 的 MSCs 细胞株。 关键词:人骨髓间充质干细胞; 细胞因子信号转导抑制分子-1; Gateway The Expression Pattern of SOCSl in Bone Marrow MSCs and the Construction of MSCs with the Over- expression of SOCSl ZOU Rui-feng ,XIE Jing-yi (Center for Stem Cells and Tissue Engineering , Sun Yat-sen University .Guangzhou 510080 China) Abstract :Obj配tive To investigate the expression pattems of SOCSl induced by inflammatory molecules in human bone m缸TOW MSCs and to construct MSCs 时th the over-expression of SOCSl. Methods Inflammatoηmolecules were used to stimulate MSCs ,their total proteins were extracted 24 hour百 later and were assay by Western Blotting for detecting SOCSl and GAPDH proteins. Using Gateway technology ,