dna重组技术的基本工具155.pptVIP

* 载体必须具备的条件： 1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存； 2、具有一至多个限制酶切点，以便与外源基因连接 3、具有某些标记基因，便于进行筛选。 （如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等 ） 载体的作用：1、将外源基因转移到受体细胞中去。 2、利用载体在受体细胞内，对外 源基因进行大量复制。 天然的DNA分子可以直接用做基因工程载体吗？ 三、“分子运输车” ——基因进入受体细胞的载体 常用的载体：质粒，还有λ噬菌体的衍生物， 动植物病毒等 能复制并带着插入的目的基因一起复制 有切割位点 有标记基因的存在，可用含氨苄青霉素的培养基鉴别 质粒为什么可以作为载体? ① 质粒 本质：质粒是一种裸露的、结构小而简单、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。 分布：许多细菌、酵母菌等生物 ② 最常用：大肠杆菌质粒 3、天然的DNA分子可以直接用做基因工程载体吗？为什么？ 不是，作为基因工程使用的载体必需满足一定条件,且都要进行人工改造后才能用于基因工程操作。 思考与探究 P7 4、DNA连接酶有连接单链DNA的本领吗？ 迄今为止，所发现的DNA连接酶都不具有连接单链DNA的能力，至于原因，现在还不清楚，也许将来会发现可以连接单链DNA的酶。 思考与探究 P7 2.“分子缝合针”——DNA连接酶 (1)两种DNA连接酶（E·coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶）的比较 ①相同点：都缝合磷酸二酯键。 ②区别：E·coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。 (2)与DNA聚合酶作用的异同:----------------------DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。 3.“分子运输车”——载体 （1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。 ②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。 ③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 （2）最常用的载体是--质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。 （3）其它载体： λ噬菌体的衍生物、动植物病毒 1．下列关于限制性核酸内切酶的叙述中，错误的是（ ） A ．它能在特殊位点切割DNA分子 B ．同一种酶切割不同的DNA产生的黏性末端能够很好 地进行碱基配对 C ．它能任意切割DNA，从而产生大量DNA片段 D ．每一种限制性核酸内切酶只能识别特定的核苷酸序列 √ 练 一练 2．在基因工程中，切割质粒和含有目的基因的DNA片段，需要使用 （ ） A ．同种限制性核酸内切酶 B ．两种限制性核酸内切酶 C ．同种DNA连接酶 D ．两种DNA连接酶 √ 练 一练 3．DNA连接酶的作用是（ ） A ．使DNA子链和母链之间形成氢键 B ．使黏性末端之间形成氢键而相连 C ．连接DNA分子中脱氧核苷酸和磷酸之间的化学键 D ．以上都不对 √ 练 一练 4．在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错误的是 A ．用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸 B ．用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体 C ．将重组DNA分子导入原生质体 D ．用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞 练 一练 （A） 5.不属于质粒被选为基因运载体的理由是（ ） A .能复制 B .有多个限制酶切点 C .具有标记基因 D .它是环状DNA √ 练 一练 本节内容小结： 1.知识梳理： DNA重组技术的基本工具： ①限制酶（分子手术刀）：识别特定的核苷酸序列并切割两核苷酸之间的磷酸二酯键； ②DNA连接酶（分子缝合针）：连接两核苷酸之间的磷酸二酯键； ③基因进入受体细胞的载体（分子运输车）：最常用的是细菌质粒，还有λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。 2.方法、技巧、规律总结： 限制酶切割的是磷酸二酯键，而DNA连接酶连接的正是两个断开此键的DNA片段。“分子运输车”是目的基因进入受体细胞的载体，它具有的若干特点是基因工程鉴定、选择、表达的关键，可以说，没有它，目的基