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根源α-半乳糖苷酶酶学性质及稳定性研究 赵静 王红蕾 山东思诺拜特生物科技有限公司 师昆景 青岛根源生物集团 α-半乳糖苷酶(α-Galactosidase，EC 3．2．1．22)也称蜜二糖酶，是一种外切糖苷水解酶。能水解非还原性末端以α-1，6键结合的半乳糖苷化合物，因此它能水解豆科植物种子的α-半乳糖苷类低聚糖，如棉籽糖、水苏糖和毛蕊花糖等。大量研究表明，将该酶添加于含大豆粕的畜禽饲料中，可有效降解饼粕类饲料原料中α-半乳糖苷物质，消除由α-半乳糖苷类物质引起的抗营养作用，同时还能促进其他营养物质的消化吸收、提高动物免疫能力和促进肠道有益微生物增殖。 本文研究α-半乳糖苷酶酶学性质及在生产和储存过程中酶活稳定性，为该酶制剂的生产和应用提供理论依据。 1 材料与方法 1.1 试验材料 α-半乳糖苷酶由山东思诺拜特生物科技有限公司提供。 1.2 试验方法 1.2.1α-半乳糖苷酶活力检测方法 执行思诺拜托企业标准：Q/SNBT 007-2009 定义：在37℃、pH值5．5条件下，每分钟10 mmol对硝基酚-α-D吡喃半乳糖中降解释放1μmol对硝基酚所需的酶量为一个酶活单位(U)。 1.2.2α-半乳糖苷酶酶学性质测定 1.2.2.1α-半乳糖苷酶pH曲线测定 分别在缓冲体系pH3.0、3.5、4.0、5.0、6.0、6.5、7.0 条件下检测产品活性，计算酶活存留率（％）。 1.2.2.2α-半乳糖苷酶温度曲线 分别在水浴温度30℃、37℃、40℃、50℃、55℃、60℃、65℃条件下检测产品活性，并计算酶活存留率（％）。 1.2.3α-半乳糖苷酶稳定性的研究 1.2.3.1 不同载体对酶活力的影响 取20 ml酶液（900U/ml）分别与50 g载体碳酸钙、硅藻土、元明粉、滑石粉、稻壳粉、玉米皮粉和淀粉混合均匀后自然晾干并粉碎，测定酶活力，计算收率（％）。 1.2.3.2 高温高湿对酶活的影响 取固体α-半乳糖苷酶，用蒸馏水调整湿度为17％，分别在温度60℃、65℃、70℃、75℃、80℃、85℃、90℃鼓风干燥箱中处理5min，然后测定α-半乳糖苷酶活力，以原酶作为对照，计算酶活存留率（％）。 1.2.3.3 金属离子对酶活的影响 分别配制Mn2+Zn2+、Cu2+、Ca2+、Na+、K+和Mg2+金属离子溶液，上述离子分别与酶液混合组成金属离子浓度为0.2 mmol/的溶液，于37℃恒温水浴4h，测定酶活力，以原酶液作为对照，计算酶活存留率（％）。 1.2.3.4 保护剂对酶活力的影响 在10ml原酶液中分别加入1％、3％、5％和7％(质量分数)4种浓度的氯化钠、甘露醇、山梨醇、甘油保护剂，保存7 d。测定不同保护剂下的酶活力。以原酶作为对照，计算酶活存留率（％）。 2 结果与分析 2．1 α-半乳糖苷酶的酶学性质 2.1.1 pH曲线α-半乳糖苷酶表1 α-半乳糖苷酶pH曲线 pH 3.5 4 4.5 5 5.5 6 6.5 7 相对活性 52.85 98.42 101.33 105.98 100 87.73 90.34 102.77 1 α-半乳糖苷酶pH曲线2.1.2 温度曲线α-半乳糖苷酶表2 α-半乳糖苷酶温度曲线 温度 30℃ 37℃ 40℃ 45℃ 50℃ 55℃ 60℃ 65℃ 相对活性 51.87 100 122.17 156.98 194.32 256.57 235.01 134.02 α-半乳糖苷酶温度曲线2.2 α-半乳糖苷酶稳定性的研究 2.2.1 不同载体对α-半乳糖苷酶的影响酶制剂的后处理工艺中采用将酶吸附在不溶性载体上时酶稳定化的主要方法。载体的成分对酶活力的影响非常大，理想的载体有助于酶与饲料中营养成分的结合，提高酶的。表3表明，无机载体对α-半乳糖苷酶活性影响很大，尤其是碳酸钙、元明粉和滑石粉，收率均为O％；有机载体中玉米皮粉效果最好，收率可高达90.83％；其次是淀粉，收率为60.97％；以稻壳粉为载体的收率低于以淀粉为载体的收率，仅为4472％。 表3 不同载体对α-半乳糖苷酶酶活力的影响 载体 理论酶活 U/g 第一次试验 U/g 第二次试验 U/g 平均收率％ 碳酸钙 360 0 0 0 硅藻土 360 157 121 38.61 元明粉 360 0 0 0 滑石粉 360 0 0 0 玉米皮粉 360 337 317 90.83 稻壳粉 360 165 156 44.58 淀粉 360 238 201 60.97 2.2.2 高温高湿对α-半乳糖苷酶的影响在中，温和湿对酶有。从表图可以看出，温度℃时处理5min，酶活损失率小于10％，说明该酶有较强的耐温能力，温度为90℃时，酶活损失率达到162％，随着温度上升，酶活损失率开始增加。 表4