糖类脂肪蛋白质鉴定.pptVIP

课后习题 * 实验2：生物组织中可溶性还原糖、 脂肪、蛋白质的鉴定 一、生物组织中可溶性还原糖的鉴定 1. 实验原理 当质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液与质量浓度为0.05g/mL的硫酸铜溶液混合后，立即生成淡蓝色的Cu(OH)2悬浊液。 Cu(OH)2与葡萄糖、果糖、麦芽糖等可溶性还原糖共热，能够生成砖红色的Cu2O沉淀。因此，利用该反应，可证明样液中含可溶性还原糖。 2 实验目的 初步掌握鉴定生物组织中可溶性还原糖的基本方法。 3 实验材料 做可溶性还原糖的鉴定实验，还原糖的含量、生物组织有无色素是影响实验结果及其观察的最重要因素。 因此要选用可溶性还原糖含量高、白色或近于白色的植物组织，其中以苹果、梨最好. 4 试剂配制 甲液（0.1g/mL的氢氧化钠溶液） 斐林试剂 乙液（0.05g/mL的硫酸铜溶液） 甲、乙试剂千万要分开放，不可混合。在实验过程中，将4-5滴乙液滴入1mL甲液中现配现用. 5 实验步骤 （1）制备组织样液（教师准备） （2）鉴定样液 先在试管中加入2mL组织样液 再加入1mL刚配制的斐林试剂 50-65摄氏度水浴加热2分钟 注意观察整个实验过程中，溶液颜色的变化！！！ 二、生物组织中脂肪的鉴定 1 实验原理 苏丹Ⅲ是可以对脂肪染色的试剂，因此，当含有大量油滴的植物细胞用苏丹Ⅲ染色后，在显微镜下可以看到细胞内橘黄色的颗粒。 2 实验目的 初步掌握鉴定生物组织中脂肪的基本方法 3 实验材料 做脂肪的鉴定实验时，所用材料一要脂肪含量高，二要有一定大小才能做徒手切片，花生种子符合该实验的要求。 将花生种子经过3-4小时的浸泡使其变软，有利于切成薄片；但浸泡时间也不宜过长，否则切片时易碎裂，切不成薄片。 4 试剂配制 苏丹Ⅲ溶液：将0.1g苏丹Ⅲ干粉溶于100mL体积分数为95%的酒精溶液中，待全部溶解后即成。 5 实验步骤 （1）切片制作 ①去掉花生种皮 ②用左手的三个手指夹住花生的一片子叶，使花生子叶高于手指之上（为什么？）。右手持刀片，将子叶削去一层，形成平面。 ③刀口向内，与花生断面平行，以均匀的动作，自左前方向右后方快速拉刀，滑行切片（注意要整个臂部用力，而不要腕部用力。）如此连续动作，切下一些薄片。 （2）染色 用毛笔将最 薄的几片材料移至洁净的载玻片的中央→滴苏丹Ⅲ溶液2-3滴于花生子叶薄片上→染色3min后，用吸水纸吸去染液→滴1-2滴体积分数50%的酒精洗去浮色→吸去多余酒精→再滴一滴蒸馏水→盖上盖玻片，制成临时装片。 （3）镜检鉴定 在低倍镜下观察，找到花生子叶切片的最薄处（最好只有1-2层细胞），移至视野的中心→换用高倍镜观察，调焦至最清晰。可发现细胞内橘黄色的圆形小颗粒，这就是脂肪滴（油滴）。若发现观察物外围也有许多橘黄色小颗粒，则是脂肪跑了出来。 三、生物组织中蛋白质的鉴定 1 实验原理 在碱性溶液（NaOH）中，双缩脲（H2NOC-NH-CONH2）能与Cu 2+作用，形成紫色的络合物，这个反应叫做双缩脲反应。 由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此，蛋白质都可与双缩脲试剂发生颜色反应。 2 实验目的 初步掌握鉴定生物组织中蛋白质的基本方法。 4 试剂配制 A液（0.1g/mL的氢氧化钠溶液） 双缩脲试剂 B液（0.01g/mL的硫酸铜溶液） 3 实验材料 做蛋白质的鉴定实验，一般选用蛋白质含量较高的大豆或鸡蛋白。 5 实验步骤： （1）制备生物组织样液（教师制备） （2）鉴定 先加2mL组织样液 再加1mL双缩脲试剂A液 加3-4滴双缩脲试剂B液 注意观察溶液中颜色的变化？ 思考：斐林试剂与双缩脲试剂在使用时能相互替代吗？为什么？ 斐林试剂与双缩脲试剂的比较分析 颜色 呈色反应条件 使用方法 反应原理 浓度 相同点 不同点 双缩脲试剂 斐林试剂 比较项目 乙液CuSO4浓度0.05g/mL B液CuSO4浓度为0.01g/mL 还原糖中的醛基被 Cu（OH）2氧化， Cu（OH）2被还原为Cu2O 具有两个上肽键的化 合物在碱性条件下与 Cu2+反应生成络合物 甲液和乙液混合均匀后方可使用，且现配现用 使用时先加A液摇匀后，再加B液 需水浴加热 不需加热