IB(VN3)疫苗和IB(4∕91)疫苗交叉保护性检测.docx

IB（VN3）疫苗和IB（4∕91）疫苗交叉保护性检测鸡传染性支气管炎(Infectious Bronchitis，IB)最早于1930年首次发现于美国北达科他州，鸡不是唯一的宿主，但目前只引起鸡的发病，各种年龄鸡都有易感性，雏鸡特别严重，可以起高死亡率，产蛋鸡虽死亡率低，但产蛋量和蛋的品质均显著下降。易感鸡与病鸡接触后48小时内出现症状，5－8天内全群暴发。传支的病原为鸡传染性支气管炎病毒(IBV)，属于冠状病毒科冠状病毒属，该病毒有20多个血清型和更多的变异株,有些血清型能产生交叉免疫，但各种血清型之间极少或没有交叉保护，给传支的预防带来极大的难度。已知血清型包括以引起呼吸道症状为主的Conn、Arkansas99等；以引起肾脏症状为主的M41、Australia“T”等；以引起“假母鸡”症状的为主的793B、VAR1变异株等。流行趋势：在国外，从2006年到2010间监测变异株占蛋鸡及种鸡传支的分离率逐年增高的趋势，分别为50%、58%、54%、46%、64%；在国内，从03年开始就陆续有学者分离出变异株。793B的商品疫苗称作4/91，VAR1的商品疫苗称作VN3。本试验采用中和试验的方法，用VN3毒株制备的阳性血清分别中和4∕91和VN3病毒，证明两者之间的交叉保护性。1. 实验材料及材料处理VN3疫苗(1000羽份/瓶，VIGOLY)一支，4-91疫苗(1000羽份/瓶)一支，VN3阳性血清4ml(自制)，10日龄SPF鸡胚35枚，生理盐水，10ml移液管，1ml移液管，1ml注射器5支，西林瓶，吸耳球，酒精灯，超净工作台，照蛋器等。2. 实验方法2.1VN3疫苗稀释VN3疫苗(1000羽份/瓶，VIGOLY)，加入5ml 生理盐水充分溶解后，此时疫苗为200羽份/ml，再做10倍稀释到20羽份/ml备用，整个操作在超净工作台中进行。2.24/91疫苗稀释4/91疫苗(1000羽份/瓶)一支，加入5ml 生理盐水充分溶解，此时疫苗为200羽份/ml，再做10倍稀释到20羽份/ml备用，整个操作在超净工作台中进行。2.3 中和与接种实验分为VN3血清阴性对照组、VN3中和实验组、4-91中和实验组、VN3阳性对照组、4-91阳性对照组和空白对照组共6组，其中和配置见下表：生理盐水疫苗稀释液20羽份/mlVN3血清中和接种VN3血清阴性对照组1ml1ml混合均匀后室温中和1小时，中间摇动一次。经尿囊腔接种鸡胚0.1ml/枚，每组5枚胚。VN3中和实验组1ml1ml4-91中和实验组1ml1mlVN3阳性对照组1ml1ml4-91阳性对照组1ml1ml空白对照组10枚同10龄鸡胚不接种。2.4 孵育观察接种后37℃下孵育观察7日，弃去接种后24小时内死亡鸡胚，24——144小时期间每日检出死胚，判定IB阴性或阳性，并记录结果。144小时后，将所有的死胚活胚取出并分开，放入冰箱冷冻，进行血凝试验检测，并剖检观察病变，其胎儿具有失水、蜷缩、发育小等特异性病痕者判为感染，据此进行计算。3. 实验结果与分析实验结果的判定标准为空白及阴性对照组：胎儿应发育正常，无失水、蜷缩、发育小等特异性病痕；取鸡胚尿囊液做血凝实验，应为阴性；阳性对照组：胎儿应有明显的失水、蜷缩、发育小等特异性病痕，取鸡胚尿囊液做血凝实验，应为阴性。2012.06.21injectVN3阳性血清阴性对照VN3中和实验组4/91中和实验组VN3阳性对照组4/91阳性对照空白对照2012.06.22 24hr2012.06.23 48hr2(-)2012.06.24 72hr2012.06.25 96hr1(-)2012.06.26 120hr2012.06.27 144hr1(-)2(-)活胚5N(-)5N(-)1P4N(-)1P(-)3P(-)5N(-)IB 感染阳性率%00201001000备注 p：感染， N：未感染，-：血凝试验阴性中和指数=（阳性对照组阳性率 - 中和组阳性率）/阳性对照组阳性率X100%空白对照组5枚均未感染，说明SPF鸡胚正常；VN3阳性血清阴性对照组5枚均未感染，且血凝试验显示100%（-），说明VN3阳性血清接种的鸡胚与空白对照组一致，VN3血清符合要求，该组作为阴性对照成立；VN3阳性对照组5枚感染，100%（-），说明VN3疫苗毒株可使鸡胚100%感染，作为阳性对照成立；4/91阳性对照组5枚感染，100%（-），说明4/91疫苗毒株可使鸡胚100%感染，作为阳性对照成立；VN3中和实验组经VN3阳性血清中和后5枚未感染，说明VN3阳性血清可以100%中和VN3疫苗毒株, 中和指数为100%；4/91中和实验组经VN3阳性血清中和后为1P4N，中和指数80%，说明VN3阳性血清可以80%中和4/91疫苗毒株。4. 实验结论；