外源性GM1对癫痫大鼠NGF在海马及大脑皮层表达的影响.pdfVIP

中国医科大学 硕士学位论文 姓名：张强 申请学位级别：硕士 专业：神经病学 指导教师：何志义 中文摘要 0言 癫痫是多种原因引起的反复发作的神经元过度放电所致发作 性突然而短暂的脑功能紊乱的一种慢性临床综合征。癫痫发作可 引起脑细胞损伤。这一损伤既是癫痫的结果又是产生新的癫痫病 灶以及癫痫反复发作的原因。长期反复癫痫发作，不仅给病人精 神，心理造成极大伤害，而且有的病人还可产生残疾，重者可发生 痴呆。然而目前临床抗癫痫药大多很难全面、迅速、有效控制癫痫， 故对癫痫患者在抗癫痫治疗同时，给予一定的脑保护剂治疗显得 尤为重要。 神经节苷脂GMl由含单唾液酸的寡糖链和神经酰胺两部分 组成，它是脑内神经节苷脂主要种类之一，在神经生理中发挥重要 作用。它在缺血性脑损伤保护作用已被大量实验证实，但对癫痫所 致脑损伤的保护作用如何，尚不十分清楚。本实验拟给予硫代氨基 脲致癫鼠腹腔注射GMl，观察其对脑损伤有无保护作用。 材料与方法 随机分入：A正常对照组5只，B生理盐水组5只，C致痫组14 只，DGMl干预组14只。c、D两组大鼠腹腔注射硫代氨基脲(7． 5 时点各随机抽取大鼠3只，共24只。在实验72小时分别从A、B 两组中随机抽取大鼠各3只，共6只。上述30只大鼠将用于免疫 组化标本制备。同时，在实验72小时分别从A、B、C、D各组中随 机抽取大鼠2只，共8只，将用于电镜标本制备。上述所有38只大 ·1· 给予左心室插管，肝素化生理盐水250mi冲洗后，分两步进行： 免疫组化标本制备，予4％多聚甲醛磷酸盐缓冲液(pH7．4) 成有海马(含CAl区)及相应大脑皮层的标本、充分固定，常规脱 水。侵蜡，制成7pm厚切片。采用链霉素一亲生物素过氧化物酶法 胞表达情况。 左心室贯注后，断头，取脑，制成有海马(含CAl区)及相应大脑皮 层标本，锇酸后固定，常规脱水，环氧树脂812包埋，超薄切片机切 片，醋酸铀、柠檬酸铅双重染色，用透射电镜观察拍片。 结 果 癫痫判定标准。I级，面肌抽搐出现咀嚼运动；Ⅱ级，颈部肌肉 抽搐出现点头运动；置级，一侧前肢阵挛；Ⅳ级，双侧前肢阵挛；V 级，双侧前肢阵挛，失去平衡跌倒。A、B两组大鼠无癫痫发作，c、 D两组大鼠均有l—V级癫痫发作。通过电镜观察：A、B两组大 鼠神经细胞结构完好，核仁清晰，染色质均匀分布，线粒体结构完 整。C组神经细胞明显水肿，核仁模糊，染色质聚集，线粒体肿胀。 D组神经细胞受损程度明显轻于C组。免疫组化染色结果显示： NGF表达为最高。 讨 论 癫痫发生机制倾向于脑内兴奋过程旺盛和／或抑制过程衰减 所致。硫代氨基脲抑制谷氨酸脱羧酶活性，使抑制性神经递质r一 ·2· 氨基丁酸(GABA)下降，而兴奋性神经递质谷氨酸升高，从而导致 癫痫。瘼《痫可引起脑细胞损伤，本实验非致癫鼠细胞形态好于癫痫 鼠支持这一结论。目前认为脑神经细胞兴奋性氨基酸释放，细胞内 Ca件积聚，脑内自由基增多等因素均可诱发癫痫，同时也造成脑细 胞损伤。而在这一过程中，内外环境的强烈变化通过受体耦联的信 关基因族。它们的基因表达蛋白可组成转录因子如活化蛋白Ap一 1，继而更为广泛地调节不同基因表达。多种生长相关基因启动子 部位均有Ap一1存在，使神经营养因子及相关受体表达增多，从 而发挥神经保护作用。NGF作为中枢神经系统最重要的神经营养 因子之一，它的生物学作用是通过NGF受体介导而实现的。它能 提高自由基清除剂的活性，稳定细胞内Na+／K+浓度比，改变兴奋 性氨基酸毒性，诱导钙结合蛋白表达，影响钙通道和钙排出系统表 达与活化，使细胞内Ca++浓度保持稳定，从而保护了受损的神经 细胞，减轻损伤，但这种保护作用在自然状况下是部分的、不完全 的。 给硫代氨基脲致癫鼠外源性腹腔注射GM