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中国医科大学 硕士学位论文 大鼠被动型Heymann肾炎模型建立 姓名：钟红珊 申请学位级别：硕士 专业：内科学 指导教师：李德天 2001.4.1 摘 要 被动Heymann肾炎是采用给大鼠注射抗近曲小管刷状缘 (FXIA)抗体而获得的一种实验动物模型。因其病变稳定、发病迅 速而被推崇，具有较大的实用性。大鼠被动Heymann肾炎与人类 膜性肾病表现极为相似，近年来，大量来自Heymann肾炎的研究 结果为深入闻明人类膜陕肾病的发病机理提供了许多珍贵资料砂产 本实验旨 过建立大鼠Heymann肾炎模型来深入探讨其病理特 点AR病MilIlArff探究“性肾病的龋”伽·结果报 告如下: 一 材料 1、实验动物:雄险Wistar大鼠20只，体重250-300克。随 机分成两组:实验组10只，对照组10只。雄性日本大耳 兔1只，体重约2000克。 2、实验器材: 鼠手术台，小手术包，低温组织匀浆机 (POLYTRONPCU)，低速离心机，低温超速高b机 (DUPONT OTD55B),温浴箱，大鼠代谢笼，光学显微镜 (OLYMPUS), 免疫荧光显微镜 (Nikon)，电子显微镜(JEM1200)。 3、实验试剂:10%水合氯醛溶液，生理盐水，肝素注射液， 氟氏完全佐剂，FITC标记的山羊抗鼠工如抗体 (购自北京 中山生物制品有限公司)，FITC标记的山羊抗兔I茄抗体 (购自北京中山生物制品有限公司)，二甲苯，酒精，0.OIM PBS液，依文思蓝等;。 二.方法 1、提取大鼠近曲小管刷习丸缘抗原 (FXlA) 2、制备抗近曲小管刷状缘 (FXlA)抗体血清 3、建立被动Heymann肾炎模型 4,U被动Heymann肾炎模型 (1) 测定24小时尿蛋白定量 (2) 测定血清白蛋白，血清总胆固醇 (3) 用光学显微镜观察肾组织切片 (4) 用免疫荧光显微镜观察荧光抗体染色后的肾组织切片 (5) 用电子显微镜观察肾组织切片 三.结果 1.实验组24小时尿蛋白定量明显升高，血清白蛋白下降，血 清总胆固醇升高。见表la 2.光镜下肾脏石蜡切片，HE染色观察无炎胜细胞浸润和毛细 血管壁增厚。见图1一。 3.免疫荧光法见至唬绿色颗粒状物沿1肾小球毛细血管壁排列， 为大鼠工即和兔I那。见图7-140 4.电子显微镜下见肾小球上皮下电子致密物沉积及基底膜不 规则增厚。见图15-170 四.讨论 Heymann肾炎的发病机理长期以来一直是有争议的问题，通 过二十余年的研究已基本阐明。目前认为其抗原存在于近曲小管 刷状缘及肾小球上皮细脚莫，为分子量330Kd的糖蛋白(GP330)o 最近更深入的研究显示，如果从抗FX1A抗体中去除抗分子量90Kd 糖蛋白(GP90)抗体后，抗GP330抗体不能与肾小球相结合，提 示除GP330外，某些其他抗原也在发病机理中起一定作用。有人 认为抗GP90抗体可能与GP330交叉连结形成免疫聚合物而发挥 作用口 VanD二 等和Couser等相继应用离体肾或经冲洗后JF-k 循环情况 卜输入抗FXIA抗体即刻可形成沿肾小球毛细血管壁分 布的免疫复合物。这一事实充分证实以肾小球非基底膜固有成分 为抗原的原位免疫复合物发病机理。Heymann肾炎、特别是被动 Heymann肾炎成为原位免疫复合物发病机理学说的重要实验依 据。大量来自Heymann肾炎的研究结果为深入阐明人类膜性肾病 的发病机理提供很多珍贵资料。 MN多发于成人，以肾病综合征 (NS)为主要f陆床特征。 从本实验所得Heymann肾炎大鼠模型研究中，可见到通过 给大鼠注射#} 曲小管刷状缘((FXlA)抗体一周后检测到对照组大 鼠24小时.尿蛋白定量明显高于正常对照组，两组比较有显著差 异，符合膜性肾病的临床表现这