大鼠脑缺血再灌注后TGF-βlt;,1gt;的表达和意义.pdfVIP

中国医科大学 硕士学位论文 大鼠脑缺血再灌注后TGF-β,1的表达及意义 姓名：房晓 申请学位级别：硕士 专业：神经病学 指导教师：何志义 2000.4.1 中文 摘 要 前 言 一 (当今社会脑梗塞严重威胁着人类健康，探讨脑梗塞的病理生 理学机制，寻求有效的治疗手段成为研究的热点。随着认识的深 人，人们提出了脑梗塞边缘带的概念和缺血再灌注损伤级联反应 学说of脑缺血再灌注损伤机制包括相互承启、交互作用的四个机 制:兴奋性毒性作用、梗死周围去极化、炎症、细胞凋亡。脑梗塞边 缘带是无灌注的中心区和正常组织间的移行区，它不是静止的，随 时间和治疗其大小发生改变。梗塞边缘带是级联反应起作用的地 方。上述研究中，转化生长因子R,(TGF一p;)的作用引起人们的 关注，作为一种具有多种生物学功能、多细胞来源的细胞因子， TGF一p，广泛参与机体的生理和病理过程。许多研究表明TGF- R，对限制脑缺血后分解代谢产物所产生的损伤级联反应有重要作 用。不少学者研究了动物全脑缺血时TGF一p:的表达，但目前国 内外尚没有利用大脑中动脉栓塞这一最接近人类脑梗塞病理特征 的模型研究TGF一pl动态表达规律的报道。本实验采用大鼠大脑 中动脉栓塞模型，研究脑局灶性缺血再灌注后TGF一R，的表达规 律并探讨其意义。 叹材料与方法 健康雄性Wistar大鼠30只，体重250一300g，随机分成10组。 正常对照组、假手术组各3只，缺血再灌注组24只，即缺血90分 钟，再灌注lh,3h,6h,12h,ld,3d,5d,7d各3只。缺血再灌注组， 按照改良的栓线法建立大脑中动脉缺血再灌注动物模型;假手术 组，除不栓线外其余操作同缺血再灌注组;正常对照组不施行手 术。上述30只动物分别在所需时间点，给予10%水合氯醛1.5nd 腹腔麻醉，左心室插管，肝素化盐水冲洗后，以4%多聚甲醛磷酸 缓冲液(PH7.4)250ml左心室灌注，断头，取脑，自额极至枕叶分 为A,B,C,D,E5等分，取C脑片，置于49C4%多聚甲醛缓冲液固 定24小时，常规脱水、浸蜡、包埋，并制成5pm厚冠状切片。采用 过氧化酶标记的链霉卵白素染色法(SP法)，用免疫组化方法检测 TGF一p:在脑组织中的表达情况。 结 果 参考Longa及Bederson的方法，于大鼠苏醒后2h进行5分制 评分。评分标准:0分，无神经功能缺损症状;;1分，不能完全伸展 对侧前爪;;2分，向对侧划圈;;3分，向对侧倾倒;;4分，不能自发行 走，意识清晰度下降;;5分，死亡。为保证缺血再灌注损伤程度的 一致性，取评分1一2分者人选，其余舍弃。脑组织形态学观察:正 常对照组和假手术组大脑半球外观正常，镜下见双侧半球组织结 构正常。缺血再灌注组:大体见额、颖、顶部颜色苍白、肿胀、脑表 静脉充血，镜下见尾状核、大脑皮质呈不同程度的缺血改变，核深 染固缩，胞体皱缩、胶质细胞增生、血管扩张，少量白细胞渗出，缺 血中心区组织疏松，形似海绵状。免疫组化染色结果显示:正常对 照组及假手术组仅在少量血管中有微弱的TGF一R，免疫阳性表 达;缺血再灌注组在梗塞中心区和梗塞边缘带血管中有显著增强 的阳性表达，软脑膜的血管中亦可见免疫阳性反应;梗塞边缘带胶 质细胞及神经元有中等强度的表达，前者的阳性表达比例高于后 者。梗塞对侧脑组织中亦可见血管阳性表达。TGF一p，阳性细胞 表达，于再灌注6h开始增多，12h明显增多，1一3天达高峰，5d之 后开始下降，至7d仍有较多阳性细胞表达。 讨 论 本实验免疫组化染色显示:正常对照组及假手术组脑组织仅 在少量血管有微弱的TGF一Pi阳性表达，缺血再灌注组在梗塞边 缘带免疫阳性细胞显著增多，梗塞中心区次之，