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大肠杆菌磷酸甘油酸脱氢酶突变体的构建及抗反馈抑制效应
468 生 物 工 程 学 报 邓辉 等/大肠杆菌磷酸甘油酸脱氢酶突变体的构建及抗反馈抑制效应
Chinese Journal of Biotechnology
/cjbcn April 25, 2016, 32(4): 468−477
DOI: 10.13345/j.cjb.150343 ©2016 Chin J Biotech, All rights reserved
工业生物技术
1,2 1 1 1,2
邓辉 ，陈存武 ，孙传伯 ，韦传宝
1 237012
2 237012
, , , . . , 2016, 32(4):
468–477.
Deng H, Chen CW, Sun CB, et al. Construction and characterization of Escherichia coli D-3-phosphoglycerate dehydrogenase
mutants with feedback-inhibition relief. Chin J Biotech, 2016, 32(4): 468–477.
摘 要: 磷酸甘油酸脱氢酶 (D-3-phosphoglycerate dehydrogenase ，PGDH ，EC 5) 为L-丝氨酸合成途径
的关键酶，其编码基因为serA ，其活性受到合成产物L-丝氨酸的反馈抑制调控。为解除丝氨酸的反馈抑制，
采用定点突变技术把编码PGDH 酶 344 位组氨酸或 346 位天冬氨酸或 364 位天冬氨酸的密码子定点突变为丙
氨酸密码子。改造后的serAFbr 被连到表达载体pT7-7 上，并转入大肠杆菌Escherichia coli BL21 (DE3) 中进行
表达，破壁回收粗酶液，通过DEAE 阴离子柱纯化PGDH 突变体，并对其酶活性和IC50 值进行了测定。结果，
野生型PGDH 酶IC50 值为 7 μmol/L ，而PGDH 双突变体N346A/H344A 催化活性与野生型相近，在丝氨酸浓
度为 160 mmol/L 时，其酶活仍保持未添加丝氨酸时酶活的96% ，基本解除反馈抑制。
: 大肠杆菌磷酸甘油酸脱氢酶，突变体的构建，解除反馈抑制
Received: July 27, 2015; Accepted: October 29, 2015
Supported by: National High Technology Research and Development Program (863 Program) (No. 2012AA021500), National Basic
Research Program of China (973 Program) (No. 2012CB720805), National Natural Science Foundation of China (Nos. H2801) .
Corresponding authors: Chuanbao Wei. Tel/Fax: +86-564-3305073
Hui Deng. Tel/Fax: +86-564-3305073; E-mail: dhup@
(863 ) (No. 2012AA021500) (973 ) (No. 2012CB720805)
(Nos.H2801)
2015-12-29
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