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肿瘤学专业优秀论文 上皮性卵巢癌多肿瘤抑制基因异常甲基化的研究 关键词：肿瘤抑制基因 上皮性卵巢癌 DNA甲基化 摘要：上皮性卵巢癌的发生是表遗传学与遗传学机制共同参与的涉及多基因改变、通过多阶段变异累积形成的病理过程。目前，在其发生机制中，DNA 启动子区CpG 岛异常甲基化是一个研究热点。表遗传学是研究没有 DNA 序列变化、可遗传的基因表达的改变，表遗传学的分子机制包括 DNA 甲基化、组蛋白修饰、染色质改型和RNA干涉等，它们在基因转录调控过程中起重要作用。作为表遗传学机制的重要内容，DNA 甲基化是基因突变及缺失之外肿瘤抑制基因失活的第三种机制，DNA 甲基化异常在多种肿瘤的发生中起重要作用。已有研究表明，肿瘤中异常甲基化的基因包括参与细胞周期调控、细胞分化、凋亡调控及肿瘤转移和血管生成相关基因等。DNA 甲基化和组蛋白乙酰化是表遗传学调控基因表达的两种主要方式，DNA 低甲基化和组蛋白乙酰化可促进基因表达，DNA 高甲基化和组蛋白去乙酰化可抑制基因表达，DNA 甲基化和组蛋白乙酰化相互影响。 卵巢恶性肿瘤是女性生殖器三大恶性肿瘤之一，上皮性卵巢癌占卵巢恶性肿瘤85％-90％，DNA 甲基化在上皮性卵巢癌的发生、发展中起重要作用。若干肿瘤抑制基因启动子区异常甲基化与上皮性卵巢癌的形成密切相关，研究表明，DNA甲基化酶抑制剂及组蛋白脱乙酰基酶抑制剂可能用于恶性肿瘤的临床治疗，包括上皮性卵巢癌在内。对肿瘤抑制基因启动子区异常甲基化的深入研究不仅有助于揭示上皮性卵巢癌的发生机制，而且可能促进上皮性卵巢癌临床诊断和治疗的发展。 本研究旨在探讨上皮性卵巢癌与表遗传学的关系，选择与细胞凋亡、细胞周期调控、DNA 修复及化疗耐药相关的基因 RASSF1A、BRCA1、p16、hMLH1发 MGMT，研究的第一部分首先通过检测基因启动子区 CpG 岛甲基化状态及其蛋白表达，寻找上皮性卵巢癌相关的异常甲基化基因，进一步分析基因蛋白表达及与启动子区甲基化的相关性，及与临床病理学特征的关系。研究的第二部分从与遗传学发生机制相结合的角度，分析上皮性卵巢癌组织中 MSI 状态，以及上述抑癌基因启动子甲基化及蛋白表达与MSI之间的相关性，探讨 MMR 基因hMLH1启动子甲基化与 MSI 的相关性以及在上皮性卵巢癌发生及发展中的作用。研究的第三部分以前两部分的实验结果为基础，选择甲基化酶抑制剂 5-Aza-CdR 及脱乙酰基酶抑制剂NaB两种药物，在观察卵巢癌细胞系生长抑制的同时，分析五个抑癌基因启动子区 CpG 岛甲基化状态、mRNA 及蛋白表达的改变，探讨药物调控的意义及潜在的临床应用价值。材料与方法一、实验材料中国医科大学附属第一医院妇科、辽宁省肿瘤医院妇科 1999-2006 年手术治疗63例原发散发性上皮性卵巢癌组织、41 例相应的盆腹腔转移灶、10 例癌旁卵巢组织及 20 例正常卵巢组织；上皮性卵巢癌细胞株：CAOV3 及 OVCaR3(中国医科大学细胞生物教研室)，HO-8910(上海肿瘤细胞研究所)，A2780(天津血液病学研究所)； RNA 提取试剂 TRIZOL Reagent(GIBCO BRL 公司)，甲基化酶抑制剂 5-aza-2’-deoxycitydine(5-Aza-CdR)及脱乙酰基酶抑制剂 Sodium Butyrate(NaB)(Sigma)，RT-PCR试剂盒(TaKaRa)，Wizard DNA Clean-up(Promega 公司)，Annexin-v-FITC 凋亡检测试剂盒(北京宝赛生物技术有限公司)，RASSF1A 羊抗人多克隆抗体、BRCA1 兔抗人多克隆抗体、P16 鼠抗人单克隆抗体(Santa cruz)，hMLH1 兔抗人单克隆抗体及 MGMT 鼠抗人单克隆抗体(Neomarkers)。 正文内容 上皮性卵巢癌的发生是表遗传学与遗传学机制共同参与的涉及多基因改变、通过多阶段变异累积形成的病理过程。目前，在其发生机制中，DNA 启动子区CpG 岛异常甲基化是一个研究热点。表遗传学是研究没有 DNA 序列变化、可遗传的基因表达的改变，表遗传学的分子机制包括 DNA 甲基化、组蛋白修饰、染色质改型和RNA干涉等，它们在基因转录调控过程中起重要作用。作为表遗传学机制的重要内容，DNA 甲基化是基因突变及缺失之外肿瘤抑制基因失活的第三种机制，DNA 甲基化异常在多种肿瘤的发生中起重要作用。已有研究表明，肿瘤中异常甲基化的基因包括参与细胞周期调控、细胞分化、凋亡调控及肿瘤转移和血管生成相关基因等。DNA 甲基化和组蛋白乙酰化是表遗传学调控基因表达的两种主要方式，DNA 低甲基化和组蛋白乙酰化可促进基因表达，DNA 高甲基化和组蛋白去乙酰化可抑制基因表达，DNA 甲基化和组蛋白乙