荧光法研究秋水仙碱和牛血清白蛋白的相互结合作用.PDFVIP

( ) 第 32 卷 分析化学 FENXI HUAXU E 　研究报告 第 5 期 　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　 2004 年 5 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 615～618 荧光法研究秋水仙碱和牛血清白蛋白的相互结合作用 刘永明 　李桂芝　孙希芬 (烟台大学化学院 ,烟台 264005) ( ) 摘 　要 　用荧光光谱法、分光光度法研究了水溶液中秋水仙碱与牛血清白蛋白 BSA 的相互结合反应。研究 5 表明 :二者以摩尔比 1 ∶1 牢固结合 ,其平衡常数 K0 = 1. 92 ×10 L/ mol 。根据 Frster 非辐射能量转移机理 ,求 ( ) ( ) 算了给体 BSA 与受体 秋水仙碱 间距离 r = 3. 63 nm 和能量转移效率 E = 0. 17 。实验表明:秋水仙碱与牛 血清白蛋白的相互结合作用为单一的荧光静态猝灭过程。 关键词 　秋水仙碱 ,牛血清白蛋白 ,荧光猝灭 ,结合反应 1 　引　　言 秋水仙碱(colchicine) 是从欧洲的百合科植物秋水仙( Colchicum aut um nale L . ) 的球茎中分离而得 到的一种卓酚酮类生物碱 ,也可从多种植物中提取。秋水仙碱可用于治疗痛风 ,对某些恶性肿瘤亦有较 好的疗效1 。近年来随着人们对其了解的不断深入 ,秋水仙碱在预防与治疗家族性地中海热、肾脏淀 粉样变、某些皮肤病及纤维化性疾病等方面均显示较好的应用前景2 。据报道秋水仙碱可与血浆蛋白 结合而有高的生物利用率 ,并且可以通过与微管蛋白的结合起到抑制细胞的增殖、分化、运动和物质运 输等作用3 。 白蛋白是主要的血清蛋白,可与许多内源、外源性化合物结合4 。本实验应用分子荧光法研究了 ( ) 牛血清白蛋白 BSA 与秋水仙碱的结合反应 ,计算了其平衡常数及结合点位 ,并根据能量转移机制计算 了秋水仙碱与BSA 结合时的作用距离。对探讨秋水仙碱的药物作用机理提供了可资参考的实验数据 与理论根据。 2 　实验部分 2 . 1 　仪器和试剂 ( ) ( 850 型荧光光度计和 U3400 型 UVVis 分光光度计 均为日本日立公司产品 ; 高纯水制备仪 日 ) 本 Millipore 公司 。 ( ) - 3 秋水仙碱 C12 H25NO6 ,399. 5 ,上海化学试剂供应站 ,配制成 1 ×10 mol/ L 储备液 ;牛血清白蛋白 (BSA ,北京军区兽医防治中心生物工程研究室 ,纯度 98 % ,分子量 68000) ,加高纯水配制成 1 g/ L 储 备溶液 ,置于 1～4 ℃冰箱中保存。 2 . 2 　实验方法 移取 1 g/ L 的牛血清白蛋白0. 2 mL 于 10 mL 具塞比色管中 ,