常用试剂培养基毕赤酵母实验技术.docxVIP

主要培养基：10×YNB（13.4%酵母氮源，含硫酸铵不含氨基酸）：溶解13.4gYNB于100mL水中，过滤除菌，加热至YNB完全溶解，存于4℃。500×B（0.02%生物素）：溶解20mg生物素于100mL 水中，过滤除菌，放于4℃。100×AA（0.5%各种氨基酸）：溶解各50mg L-谷氨酸，L-蛋氨酸，L-赖氨酸，L-亮氨酸，L-异亮氨酸于100mL 水中，过滤除菌，存于4℃。10×D（20%葡萄糖）：溶解200g D-葡萄糖于1 000mL水中，高压灭菌15min或过滤除菌，可放1年。500×生物素(0.02%)：溶解20mg生物素于100mL水中，过滤除菌，放于4℃，可放1年。100×H（0.4%组氨酸）：溶解400mg L-组氨酸于100mL水中，低于50 度加热以促溶解，过滤除菌，可放1年。10×M（5%甲醇）：混合5mL甲醇与95mL水，过滤除菌存于4℃，可放2个月。10×GY（10%甘油）：混合100mL甘油与900mL 水，过滤或高压灭菌，室温放置，可存放1年以上。100×AA（0.5%各种氨基酸）：溶解各50mg L-谷氨酸，L-蛋氨酸，L-赖氨酸，L-亮氨酸，L-异亮氨酸于100mL水中，过滤除菌，存于4℃，可放1年。1mol/L磷酸钾缓冲液 pH6.0：32mL 1mol/L K2HPO4，868mL 1mol/L KH2PO4，调整pH值为6.0±0.1（如果需调pH值，用磷酸或KOH）。过滤或高压灭菌，室温下可放1年以上。100mg/mL遗传霉素：用无菌水制备30mL 100mg/mL 遗传霉素贮存液，过滤除菌，存于-20℃。用来制备含不同终浓度遗传霉素平板：0.25，0.5，0.75，1.0，1.5，1.75，2.0，3.0，4.0。LB培养基：5%酵母提取物，10%胰蛋白陈，10%NaCI，pH7.0；高压灭菌后4℃保存。LB平板培养基在LB液体培养基中加入琼脂粉15g，高压灭菌，冷却至45℃左右时倒平皿，4℃保存。LA平板培养基待LB液体培养基冷却至45℃左右加入Amp (100μg/mL)，摇匀后倒平皿，4℃保存。YPD培养基：1%酵母提取物，2%胰蛋白膝，2%葡萄糖；RDB转化固体培养基：(Regeneration Dextrose Medium+ Histidine)（lmol/L山梨醇，l%葡萄糖，1.34% Yeast Nitrogen Base with Ammonium Sulfate with amino acids(YNB)，0.00004%Biotin，0.005%谷氨酸，0.005%甲硫氨酸，0.005%赖氨酸，0.005%亮氨酸，0.005%异亮氨酸，1.5%琼脂；）100mL：超纯水 80ml，山梨醇 18g(186g/L)，琼脂糖2g（20g/L） 121℃灭菌20分钟，待温度将至60℃以后，在超净台内加入10*YNB 10ml, 10*D（20%葡萄糖）10ml, 500*B（0.02%生物素）0.2ml 100*AA（含每种氨基酸0.5%）1ml.混匀，倒平板。YPD-遗传霉素平板：1%酵母浸出物，2%蛋白胨，2%葡萄糖，2%不同量的遗传霉素4.0，250mL（8-10个遗传霉素平板）。取1g G418溶于1ml 1M的HEPES液或PBS中，加蒸馏水至10ml，过滤消毒，4度保存。具体方法如下：1g包装的G418瓶子中，加入10ml HEPES溶液，浓度为100 mg/ml完全溶解后，0.22 um过滤，－20度保存。HEPES缓冲液配方如下：90 ml 水中，0.8 g NaCl, 0.037 g KCl, 0.0135 g Na2HPO4.2H2O, 0.1 g 葡萄糖，0.5 g HEPES,溶解，NaOH调PH至7.05,定容至100ml。0.50mg/ml，0.75mg/ml，1.0mg/ml，2.0mg/ml，4.0mg/ml五个梯度MD：选择培养基：(Minimal Dextrose Medium+ Histidine) （1.34%YNB，0.00004%Biotin，2%葡萄糖，1.5%琼脂；）100mL：向80 mL 超纯水中加入琼脂糖2g（20g/L），121℃灭菌20分钟，待温度将至60℃以后，在超净台内加入10*YNB 10ml, 10*D（20%葡萄糖）10ml, 500*B（0.02%生物素）0.2ml，混匀，倒平板。MM：选择培养基：(Minimal Methanol+ Histidine )（1.34%YNB，0.00004%Biotin，0.05%甲醇，1.5%琼脂；）100mL：向90 mL 超纯水中加入琼脂糖2g（20g/L），121℃灭菌20分钟，待温度将至60℃以后，在超净台内加入10*YNB 10m