2013年基因工程讲解.ppt

基因工程主要内容 一、基因及基因工程概述 二、基因工程理论基础 三、DNA重组技术 1 DNA重组路线 2 基因工程中用的酶 3 基因工程载体 4 目的基因的获得 5 重组DNA导入受体细胞 6 重组体筛选与鉴定 7 目的基因的高效表达 四、基因工程的应用及发展前景 第一节 基因及基因工程概述 1 基因工程的发展历程 2 基因工程的概念 3 基因工程的主要内容 1 基因工程的发展历程 孟德尔定律：生物每一个性状都是通过遗传因子来传递的，遗传因子是一些独立的遗传单位。这样把可观察的遗传性状和控制它的内在的遗传因子区分开来了，遗传因子作为基因的雏形名词诞生了。 1903年萨顿和鲍维里两人注意到在杂交试验中遗传因子的行为与减数分裂和受精中染色体的行为非常吻合，他们作出“遗传因子位于染色体上”的“萨顿—鲍维里假想”。 1909年丹麦遗传学家约翰逊在《精密遗传学原理》一书中提出“基因”概念，以此来替代孟德尔假定的“遗传因子”。从此，“基因”一词一直伴随着遗传学发展至今。 1926年摩尔根《基因论》：基因以直线形式排列，它决定着一个特定的性状，而且能发生突变并随着染色体同源节段的互换而交换，它不仅是决定性状的功能单位，而且是一个突变单位和交换单位。 1941年比德尔和塔特姆提出一个基因一个酶学说，证明基因通过它所控制的酶决定着代谢中生化反应步骤，进而决定生物性状。 1949年鲍林与合作者在研究镰刀型细胞贫血症时推论基因决定着多肽链的氨基酸顺序。 1944年艾弗里、麦卡蒂等人发表了关于“转化因子”的重要论文，首次用实验明确证实：DNA是遗传信息的载体。 1953年Watson和 Crick提出了DNA双螺旋结构模型。 1957年Benzer以T4噬菌体作为研究材料分析了基因内部的精细结构，提出了顺反子学说。从而认为基因为DNA分子上一段核苷酸顺序，负责着遗传信息传递。 1967 Nirenberg和 Khorana等破译了全部64个遗传密码。 1970年Temin发现逆转录酶这一成就进一步发展和完善了“中心法则”。 1972年 美国P.Berg领导的研究小组完成DNA体外重组，获得了猿猴病毒SV40和λDNA的重组杂种DNA分子 1973年，S.Cohen等人成功的将外部质粒基因重组导入大肠杆菌内，获得了既抗卡那霉素又抗四环素的菌落 1982年开发出第一个基因工程药物：胰岛素 基因工程三大理论基础 遗传物质是DNA DNA的双螺旋结构 遗传信息传递方式：中心法则 技术上的三大发明 工具酶 载体 逆转录酶 2 基因工程的概念 基因工程的定义：按照人们的愿望对携带遗传信息的分子（DNA）进行设计和改造的分子工程，包括基因重组、克隆、表达；其核心是构建重组DNA的技术。 （P21） 3 基因工程的主要内容 基因工程实施4个必要条件： 工具酶 基因 载体 受体细胞 基因工程研究的主要内容 带有目的基因的DNA片断的分离或人工合成 在体外，将带有目的基因的DNA片断连接到载体上，形成重组DNA分子 重组DNA分子导入受体细胞 带有重组DNA分子的细胞培养，获得大量的细胞繁殖群体 重组体的筛选 重组体中的目的基因的功能表达 第二节 基因工程理论基础 DNA的结构与复制 DNA的变性、复性与杂交 RNA的转录与逆转录 基因的表达与调控 1 DNA的结构与功能 1）DNA的分子组成与基本结构 2）DNA分子的二级结构 3）DNA的复制 1）DNA的分子组成与基本结构 碱基 ——嘧啶碱 ——嘌呤碱 核苷： N－C键，糖环上的C1与嘧啶碱 的N1或与嘌呤碱的N9相连接 （3）核苷酸：戊糖羟基被磷酸化，多是5’-核苷酸。用碱水解RNA，可得到2’-与3’-核糖核苷酸的混合物 脱氧核糖核酸（DNA） （1）Chargaff法则 ——A＝T，G＝C， A＋G＝T＋C ——DNA的碱基组成具有种的特异性 （2）DNA的一级结构，形成3’,5’-磷酸二酯键 2）DNA的二级结构 DNA双螺旋模型基本特点 两条反向平行的多核苷酸围绕同一中心轴相互缠绕 嘌呤与碱基位于双螺旋的内侧，磷酸在外测 双螺旋的平均直径为2nm 两条核苷酸依靠彼此之间形成的氢健相联系而结合在一起 碱基在一条链的顺序不受任何限制，但是两条链之间互补。 3) DNA的复制 复制方式：半保留复制， 复制的起点和过程：在特定位点（复制起始点）开始，在通常情况下，复制是双向的和对称的，每一条双链链都是由一条亲链和一条子链组成，复制高度忠实。复制在起始阶段进行控制，一旦复制开始，即继续下去，直到整个复制子（能独立进行复制的单位）完成。 DNA复制过程（原核生物） DNA复制叉