同型半胱氨酸测定检测操作程序.docVIP

概述 血清同型半胱氨酸(Hcy)是人体内含硫氨基酸的一个重要的代谢中间产物，可能是动脉粥样硬化等心血管疾病发病的一个独立危险因子。Hcy水平升高被认为是动脉粥样硬化性疾病独立的渐进性致病因素，血浆中同型半胱氨酸含量与遗传因素、营养因素、雌激素水平、年龄因素等有关，同型半胱氨酸又称为高半胱氨酸，Hcy的正常参考值随测定方法和种族人群的不同而有所不同，一般正常空腹血浆总Hcy水平为5-15μmol/L。研究表明：Hcy每升高5umol/L脑卒中风险升高59%，缺血性心脏病风险升高32%；Hcy每降低5umol/L脑卒中风险降低24%，缺血性心脏病风险降低16%.Hcy水平与心血管事件风险呈正相关血清同型半胱氨酸Hcy被转化为游离型Hcy后，进行一系列循环反应，这种基于共价 底物转化产物的酶循环反应系统大大提高了检测的灵敏度，主要是利用S-腺苷同型半胱氣酸(SAH)水解酶反应原理， 在该反应中SAH被水解酶水解成腺苷和Hcy,腺苷立即水 解成氨和次黄嘌呤，氨在谷氨酸脱氢酶的作用下，NADH 转化为NAD,样本中Hcy浓度与NADH转化速率成正比。 3 标本采集与保护 新鲜无溶血血清或EDTA、肝素抗凝血浆 遵守以下推荐的血清标本处理，运行和储存步骤 3.1用真空采样管采集血液标本时须遵守常规注意事项 3.2离心前使标本完全自然形成凝块 3.3全程保证样品管的密闭状态 3.4尽快分离血清，并及时测定 3.5如果标本不能在24小时内检测或运送标本时，将标本保存在4℃或更低温度的环境中： 3.6冷藏标本室温放置20分钟后再测定； 3.7冷冻标本室温解溶后放置20分钟后再测定 3.8不符合标本处理 3.8.1溶血和乳糜血标本在报告单的备注栏注明 3.8.2标本量过少的标本，严重溶血和乳糜血标本与临床沟通并将标本退回，填写不合格标本拒接登记。 4 试剂和设备 4.1试剂 采用深圳奥萨制药有限公司试剂 4.1.1试剂组成 试剂1 S-腺苷甲硫氨酸（SAM) 0. 1 mM 烟酸胺腺嘌呤二核苷酸（NADH) 0. 3 mM 三（2-羧乙基）膦氯化氢（TCEP) 0. 5 mM α—酮戊二酸（Oxoglutarate) 5. 0 mM Hcy甲基转移酶（HMTase) 5.0 KU/L 试剂2 谷氨酸脱氢酶（GLDH） 10.0 KU/L S-腺苷同型半胱氨酸（SAH）水解酶（SAHase） 3.0 KU/L 腺苷脱氨酶（ADA） 5.0 KU/L 4.1.2试剂准备;恢复室温后使用 4.1.3试剂保存 试剂2~8℃避光保存，并于有效期为12个月 4.2质控品 质控品为与试剂配套的临床化学质控品 4.3警告和注意事项 4.3.1只可用于体外诊断； 4.3.2试剂中含有防腐剂和稳定剂，可能存在一定刺激作用和毒性，请勿直接接触皮肤和眼睛，请勿吞服； 4.3.3试剂盒的测定结果仅作为临床各种疾病的辅助诊断依据 4.4仪器 便携式同型半胱氨酸监测仪 5 操作程序 5.1检测过程流程 签收样品→离心→上机检测→审核报告→签发报告→标本保存 5.2样本签收 严格按标本接收程序签收标本 5.3标本处理 以3000r/min，离心6~10min，分离血清上机测定，若标本不能及时检测，将分离血清冷藏于2~8℃的冰箱内 5.4标本检测 5.4.1从冰箱中取出试剂1 (R1)和试剂2 (R2),使试剂恢复至室温； 5.4.2按照便携式同型半胱氨酸检测仪操作方法，插卡，输入样本信息，确认； 5.4.3按照仪器提示，精密量取8 u 1样本加入试剂1的比色管中； 5.4.4启动反应，等到仪器发出提示音后，按照仪器操作步骤，精密量取40 u 1试剂2加入比色管中； 5.4.5仪器启动检测； 5.4.6自动检测完成后，读取检测结果或打印报告 5.5检验后标本保存 保存在标本冰箱内，保存期为7d 6 校准程序 6.1校准品的准备和储存 直接使用，2~8℃保存。 6.2校准条件 在室内质控失控，或更换仪器主要配件，或进行大保养后均需校准。无特殊情况校准周期为21d 6.3校准程序 本仪器校准由厂家工程师负责校准。 7 质量控制程序 7.1控制品的准备和储存 试剂2~8℃避光保存 7.2控制品水平和分析批长度 每24h至少进行1批。 7.3质控操作程序 参见生化组的质量控制操作程序。 8 性能参数 8.1准确性 线性偏差不超过±10% 8.2精密度 CV≤10 8.3线性范围 3~48umol/L 9 生物参考区间