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第3章 色谱柱 色谱柱的构造： 　　柱管、压帽/卡套、筛板（滤片）、接头 分析型 　　常规分析柱（4.0/3.9mm、4.6mm） 　　窄径柱（1.0mm、2.1mm） 　　毛细管柱（0.2-0.5mm） 　制备型 　　半制备柱（〉5mm，7.8mm、9.8mm、10mm） 　　制备柱（21.2mm、30mm、50mm） 柱填料 3-1-1柱填料 一 硅胶微粒 硅胶微粒是当前使用最多的HPLC填料. 优点:物理性质优秀; 机械强度高；反压较低，柱寿命长；柱效最高；表面化学性质理想，不溶涨。 粒度(10、5、3um)；孔径变化范围宽（8、30、100）；孔径分布范围窄。 硅胶微粒 缺点： PH值限制 2-8或2-9 硅胶填料的纯度、比表面积与孔径大小、表面化学性质不同，其具有的色谱性质不同。下面我们简单的讨论以下三个问题。 ①表面积与孔径大小 全多孔硅胶的制备工艺： 硅溶胶与甲醛和尿素加在一起，酸性介质中搅拌，发生聚合反应，得到的聚合物，高温灼烧（700℃）除去尿素与甲醛聚合物，可以得到粒度分布范围窄的二氧化硅小球。（硅溶胶法） 具备 粒度小且均匀；机械强度好；孔径大小可控；寿命长等优点。（图5-1） ①表面积与孔径大小 从保留的角度讲：对同一溶质，硅胶的表面积越大，保留值越大。比表面积可以从100m2/g---860m2/g。孔径与比表面积有相反的趋势，即孔径小，比表面积大；孔径大比表面积小。 从分离的角度讲：适宜的孔径尺寸可使样品分子进到填料微粒的内部，同时样品分子在空腔内扩散相对较快。要求孔径直径比样品分子直径至少大3倍。分离小分子物质通常用70—150A孔径；分离大分子物质通常用300A孔径。 ②表面化学性质（图5-3） 经800℃以上高温后，硅醇基大部分脱掉在HPLC上无价值。 硅胶表面完全羟基化，理想状态 自由型（非键合型）硅醇基，酸性较大可使一些碱性物质拖尾 双基型（氢键键合型） 将传统纯度不高的酸性硅胶称为“A型硅胶”；将纯化的弱酸性的硅胶称为“B型硅胶”。见下面的例子（图5--4） ③高纯硅胶 硅胶填料在制造过程中会含有少量金属离子杂质 现在各公司都在推广一种高纯硅胶，高纯硅胶是除去了大部分表面金属离子的硅胶。 二 多孔聚合物 二乙烯基苯+苯乙烯制成聚苯乙烯 异丁烯酸和乙烯醇制成聚乙烯醇 可以用做反相色谱的分离填料，或离子交换固定相的担体。 缺点：柱效低，分离慢。 柱效不到类似硅胶柱的一半。 优点：使用的PH范围宽1---13 三 其它无机填料 石墨碳 不需要表面键合既可用于反相色谱分离；用于分离C18键合相上保留太小的化合物，及其一些异构体的分离。易碎裂，柱效低，杂质污染不可逆 氧化铝 优点PH值可达12， 氧化锆 PH1—14，聚合物涂层的多孔氧化锆微球。 四 聚合物涂层硅胶 资生堂划时代的专利产品: 包被了silicon polymer薄膜的capsule(胶囊)型充填剂 兼有 silica gel型充填剂的分离性优势 和 polymer 型充填剂的在现性优势onventional ODS polymer薄膜象一层胶囊一样,将酸性硅醇基和金属杂质的影响减小到极限。 耐碱性的polymer薄膜扩展了适用范围( pH 2-10), 延长了柱寿命,令使用更灵活。 低柱压,可进行快速分离。 卓越的选择性 有不同等级和多样品种可供选择。 polymer薄膜和官能基化学修饰是优异的重现性的最佳保证。 提供GLP/GMP 支持 (UG, MG) ? CAPCELL PAK柱消除了由溶质与痕量金属杂质和硅醇基相互作用而造成的峰拖尾,从而具有卓越的耐用性和重现性。 与一般的ODS不同, CAPCELL PAK柱采用了两步合成: 1)通过气相沉积作用(CVC法)在超纯硅胶表面包被一层均匀致密的silicon polymer薄膜, 2) 在polymer薄膜之上键合不同官能基,从而遮挡残留的酸性硅醇基 (Fig.1)。这种独特的设计既增加了机械强度又扩大了PH安定性，同时,为改善酸性,中性和碱性化合物的峰形提供了保证。CAPCELL PAK结合了硅胶柱和polymer column的优势, 因而具有优异的分离效率和化学安定性 (Table 1)。 五、碳杂化硅胶 小结： 柱填料的种类 1硅胶 全多孔 高纯 涂层 杂化