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中缅树鼩NPY、POMC和CART基因部分序列进化亲缘关系比较 朱万龙，张浩，王政昆( （云南师范大学生命科学学院，昆明65000） 摘要：NPY、POMC和CART是下丘脑调节能量稳态的重要神经肽，在进化中非常保守，能准确反映远缘物种间的亲缘关系。该研究通过RT-PCR扩增中缅树鼩NPY、POMC和CART基因，分别获得133bp、276 bp和50 bp的cDNA片段，包含的开放阅读框(open reading frame, ORF)分别为131 bp、272 bp和48 bp，各自编码43、90和16个氨基酸。通过BLAST搜索，所得中缅树鼩NPY、POMC和CART基因cDNA序列与普通狨(Callithrix jacchus)、猕猴(Macaca mulatta)、苏门答腊猩猩(Pongo abelii )、智人(Homo sapiens)、东非狒狒(Papio Anubis）、小耳大婴猴(Otolemur garnettii)、白颊长臂猿(Nomascus leucogenys)、灰仓鼠(Cricetulus griseus)和褐家鼠(Rattus norveqicus) 的NPY、POMC和CART氨基酸序列同源性很高。同时，本研究通过ML方法以NPY、POMC和CART序列构建系统进化树，发现中缅树鼩与灵长类聚为一支，揭示了中缅树鼩与灵长类较近的亲缘关系。 关键词：中缅树鼩；神经肽Y；阿片促黑色素原；可卡因-安他非明转录调节肽；下丘脑 中图分类号：Q955下丘脑在维持能量代谢活动中发挥关键作用，下丘脑核团之间通过神经肽形成的调控网络是能量平衡的基础，其不同核团通过分泌神经肽以及神经元间的投射通路在机体摄食活动和能量活动中发挥调节作用[1]。下丘脑内与机体能量平衡调节的核团和区域有弓状核(ARC)、腹内侧核(VMH)、背内侧核(DMN)、室旁核(PVN)和下丘脑外侧区域(LHA)。下丘脑神经元分泌的神经肽Y(Neuropeptide Y, NPY)主要存在于下丘脑ARC，是一类促进食欲神经肽，可增加食物摄入量和抑制能量消耗[2]，而阿片促黑色素原(Pro-opiomelanocortin, POMC)和可卡因-安他非明转录调节肽(Cocaine and amphetamine regulated transcriptpeptide, CART)是一类抑制食欲神经肽，可抑制食物摄入和刺激能量消耗[3]。下丘脑内NPYAgRP和POMCCART的平衡代表了下丘脑能量调节平衡的正常状态[4]。NPY是一个36个氨基酸的肽，广泛分布于中枢和外周神经系统，于1982年首次从猪脑中提取纯化出的一种具有生物活性的内源性信息物质[5]，与AgRP常处于ARC的同一神经元[2]，多数ARC分泌NPY神经元也同时表达AgRP，因此NPY和AgRP能表现出相同的变化。研究表明脑室内注射NPYAgRP可增加食物摄入量，并且AgRP可以选择性的增加脂类食物的摄入量[6]。POMC是一种由267个氨基酸组成的前体蛋白，POMC系统的神经肽与NPY的作用相反，其和CART都是分布于下丘脑的重要厌食性神经肽，在动物的应急、摄食和能量代谢等的调节中起着重要作用，可抑制动物的摄食行为，降低体重[7-8]。 中缅树鼩(Tupaia belangeri)属攀鼩目(Scandentia)树鼩科(Tupaiidae)，是东洋界特有的小型哺乳动物，在国内仅有中缅树鼩一种，以现生树鼩的分布特征来看，云贵高原及其附近的横断山地区可能构成了中缅树鼩的分布北限[9]。树鼩在生理解剖、神经发育、肝炎病毒感染特性及心理应激模式等方面与灵长类，甚至人类高度相似[10]，被广泛应用于人类医学实验研究的诸多领域。国内关于中缅树鼩的相关研究主要集中于冷驯化条件下的代谢产热特征[11-12]、蒸发失水[13]、血清瘦素[14]、光周期和能量代谢特征[15]、季节性的体重和产热特征的变化[16]以及基因组的克隆[17]等研究。而关于下丘脑神经肽基因在中缅树鼩中的研究报道还很少，通过对中缅树鼩NPY、POMC和CART基因部分序列扩增与分析的研究，对其能量调节机制的揭示会有重要意义。本论文以中缅树鼩下丘脑为材料，运用RT-PCR技术从中缅树鼩下丘脑组织的总RNA中扩增出NPY、POMC和CART 3个基因的表达序列cDNA，并把该序列与其他物种进行了同源性比较，为进一步研究NPY、POMC和CART 3个基因和中缅树鼩的能量代谢提供基础资料。 1 研究方法 1.1 实验动物及分布区概况 中缅树鼩捕自昆明禄劝县灌丛，海拔1879 m，北纬25°26′～26°22′，东经102°13′～102°57′，该地区位于滇中高原北部，气候属于北亚热带高原气候，年平均温度为15.6 ℃；最热月为7