分子生物学2009-2010-0染色体与DNA-5半不连续复制与修复.DOC

教学单元教案格式 4 第二章 染色体与DNA 课程教案 授课题目：第2章 染色体与DNA 第3节半不连续复制与修复 教学时数： 2 授课类型： 理论课 □ 实践课 教学目的、要求： 理解：DNA半不连续复制的过程及其意义 深入了解：DNA聚合酶的结构 深入掌握：复制的原理、过程 了解：端粒的复制原理 教学重点： 重点阐明：酶学 重点指出：复制的方向问题，是如何解决这个问题的 教学难点： 绝对难点：DNA复制的酶学 相对难点：复制的过程的描述 教学方法和手段： 老师讲授为主：讲授 视频演示 PPT演示 讨论。以电脑幻灯片边演示边讲述为主，（白板课件）辅以板书（黑板板书） 学生回答问题为辅：（如时间等条件许可的情况下） 注：以下内容按实际需要进行取舍 要求有多媒体，因为信息量大，许多结构图需要媒体放映，效果才好 第四讲 染色体与DNA 课程教案 教学内容及过程 旁批 教学内容与教学设计：（第一课时） 1 复习：DNA复制的大致过程 1、 双链解开 2、 引发体形成 3、延伸 4、 终止 复制的终止比较简单，当复制叉遇到DNA序列上重复出现的终止序列时， 切除RNA引物，填补缺口，连接相邻的DNA片段（复制终止） 在DNA聚合酶Ⅰ催化下切除RNA引物；留下的空隙由DNA聚合酶Ⅰ催化合成一段DNA填补上；在DNA连接酶作用下，连接相邻的DNA链 一个问题？ 在复制叉上DNA聚合酶分子要负责两条模板链的复制，虽然新生链的生长方向只能是5’-----3’，但是两条模板链的方向又是相反的，所以新生链的合成方向也是相反的。如果酶分子沿着一条模板链向前进，那么另一条模板链上的复制就无法进行，但是体内观察发现两条链上的复制几乎是同时进行的，这个问题是怎么解决的？ 两个酶分子？ NO！ 复制叉上根本容纳不了两个酶分子 两个活性中心？ YES WHY？ 2 冈崎的发现 3H标记复制中的DNA DNA复制过程中总是存在一条长的新生链 还存在一些短的小片段DNA单链，而且这些小片段DNA单链在DNA连接酶的作用下能够转化为成熟的DNA链 小片段长度约在1000-2000bp 再推断 1、DNA复制过程中两条链不是同时合成的，存在一定的时间差 2、一条链先合成是连续的，称为前导链；另一条链是不连续的，称为后随链 3、一个酶分子同时完成前导链和后随链的复制，说明这个酶分子有两个活性中心，一个活性中心复制前导链的合成，另一个活性中心负责后随链的合成 DNA聚合酶的结构特点：双组分不对称 两个核心酶各负责合成一条链 DNA聚合酶的组装过程 链延伸过程中的酶： DNA聚合酶的双组分不对称结构保证了先导链的连续复制和后随链的不连续复制，结果两条链可以在各自的模板上同时前进 详细的文字解释： 当先导链复制出大约一个冈崎片段长度，在后随链上暴露出第一个引物结合位点，引发酶引发一段引物，夹子安装机就将β夹子结合上来，继而核心酶结合，形成全酶，后随链的α亚基利用这段引物合成第一个冈崎片段。由于先导链上的合成一直在持续，复制叉前端还在解链，于是新解开的后随链模板就形成了一个loop结构。随着loop的形成，后随链上的核心酶解离，释放出已经合成的冈崎片段，并且在复制叉前端暴露出了下一个冈崎片段的引物，于是β夹子结合上来，继而核心酶结合，形成全酶，完成下一个冈崎片段的复制。。。。。。如此重复直至终止。 滞后链的延长: DNA pol Ⅲ全酶二聚体的另一亚基与形成一个环的滞后链的模板结合发挥催化作用。 由于模板形成环, 酶向前移动时, 滞后链合成片段也沿5′→3′方向生长, 与酶催化方向一致。 滞后链片段合成接近前方滞后链片段5′末端时, 模板被释放, 环消失。继续重复, 连续进行 半不连续复制模型 3、几种复制方式 线性DNA的复制： 复制叉式的复制 环状DNA的复制： θ复制 滚环复制 D环复制 需要特殊引物或者不需要引物的复制 1. 线性DNA双链的复制 特点： 1、多个起点，起点都不在线性DNA的端点（末端），而是在内部 2、采用复制叉式的双向复制，两个复制叉，两个方向，有先导链和后随链之分 3、末端的复制采用特殊的方式（后面讲） 4、真核生物采用的复制方式： 2. 环状DNA双链的复制 多数环状DNA采用的复制方式 复制叉式复制，两个复制叉，双向等速或者不等速复制 有先导链和后随链之分 3. 滚环复制 环状亲本DNA，双链 限制性内切酶在复制起点识别特异序列，切开一条单链 5’末端常常与特殊的蛋白质结合，受到保护，而在3’末端不断地由DNA聚合酶催化，以没有切断的那条环形链为模板，合成新的互补链 3’端不断的滚动，而5’端则不断地被甩出去