JB0902叶绿素a的不确定度报告.doc

叶绿素a测定的不确定度分析 1．目的 对测定水中叶绿素a的测量不确定度进行分析，找出影响不确定度的因素，对不确定度进行评估，给出不确定度，如实反映测量的置信度和准确性。 2．适用范围 适用于水中叶绿素a含量的测定。 3．职责 3.1 检测人员应严格按照操作规程操作仪器，确保测量过程中仪器正常运转，消除各种可能影响实验结果的意外因素；掌握不确定度的计算方法，了解影响不确定度的影响因素。 3.2 复核人员负责检查原始记录及不确定度的计算方法。 3.3 科室负责人负责批准不确定度的分析方法和报告。 4.不确定度分析 4.1 测量方法简述 按浮游植物采样方法采样，分析取样量水库水为1L，湖泊、池塘水为50-100 ml。通过抽滤用醋酸纤维滤膜浓缩水样，载有浮游植物的滤膜先置于冰箱40C干燥6-8小时，再用90%丙酮提取叶绿素a，离心，取上清液用90%丙酮定容为10 ml。将上清液倒入1cm厚的比色皿，以90%丙酮作参比，在722型光栅分光光度计上分别读取750nm、663 nm、645 nm、630 nm 波长处的吸光度，根据下列公式计算出叶绿素a含量。 公式： （1） 式中：C—叶绿素a含量，mg/m3； V2—取样体积，l； D—吸光度； V1——定容体积，ml； δ—比色皿厚度，cm。 4.2 建立数学模型 由公式（1）可见，通过分析4个波长所得吸光度，容量瓶、比色管、比色皿厚度的不确定度便可得出被测样品叶绿素a浓度C的合成不确定度。 由不确定度的传播律可得出被测量叶绿素a含量C的合成不确定度 Uc（C）及其方差： 式中：uc(C)—样品中叶绿素含量测定的合成不确定度； u(D750)－750nm波长下吸光度的标准不确定度； u(D663)－663nm波长下吸光度的标准不确定度； u(D645)－645nm波长下吸光度的标准不确定度； u(D630)－630nm波长下吸光度的标准不确定度； u(V2) －取样体积的标准不确定度； u(V1)－样品定容体积的标准不确定度； u(δ)－比色皿厚度的标准不确定度。 公式（2）中各个因子的传播系数为：  5．标准不确定度的计算 5.1 四个波长吸光度的标准不确定度评定 分别采集浓度低的水库水（样品量为1000ml）(样品量为50～100ml)进行平行样测定，这部分已经包括研磨和离心等前处理过程对不确定度的影响。 四个波长吸光度的标准不确定度由两部分组成：重复读数的不确定度和分光光度计刻度的不确定度。 5.1.1 四个波长吸光度的不确定度A类评定就是它们的标准偏差。 5.1.1.1 当取样体积为1L时，5个平行样品在四个波长处的吸光度及其标准偏差列于表1。 表1 吸光度（D） 750nm 663nm 645nm 630nm 1 0.003 0.018 0.007 0.006 2 0.003 0.017 0.005 0.005 3 0.003 0.016 0.005 0.004 4 0.003 0.015 0.005 0.004 5 0.003 0.017 0.005 0.004 平均值 0.003 0.0166 0.0054 0.0046 0.00 5.20×10-6 3.20×10-6 3.22×10-6 0.00 5．10×10-4 4.00×10-4 4.00×10-4 5.1.1.2 当取样体积为100ml时的吸光度，5个平行样品在四个波长处的吸光度及其标准偏差列于表2。 表2 吸光度（D） 750nm 663nm 645nm 630nm 1 0.002 0.029 0.009 0.007 2 0.002 0.027 0.009 0.006 3 0.002 0.026 0.009 0.007 4 0.002 0.029 0.010 0.007 5 0.003 0.029 0.010 0.007 平均值 0.0022 0.028 0.0094 0.0068 8.0×10-7 8.0×10-6 1.20×10-6 8.0×10-7 2.00×10-4 6.32×10-4 2.45×10-4 2.00×10-2 5.1.2 四个吸光度的不确定度的B类评定：因为722型分光光度计最小刻度的变化为0.001，所以分光光度计的B类不确定度为： 5.1.3 四个吸光度的标准不确定度为 5.1.3.1 当取样体积为1L时吸光度的不确定度为: 5.1.3.2 当取样体积为100ml时吸光度的不确定