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实验二十八 植物组织中糖和淀粉含量的测定 植物碳水化合物含量的测定，通常是先用80－85﹪乙醇提取，在此浓度的乙醇溶液中，还原糖和非还原糖（主要是蔗糖）溶解而淀粉沉淀，然后过滤，滤液用于测定可溶性糖（包括还原糖和蔗糖），残渣用于测定淀粉。还原糖可根据其还原能力大小直接测定其含量，蔗糖和淀粉先经水解生成还原糖，测其含量，然后换算成蔗糖和淀粉含量。本实验的目的在于掌握植物组织中可溶性糖和淀粉含量的测定原理和方法。 Ⅰ、还原糖含量的测定（3,5－二硝基水杨酸法） 目的 掌握用3,5—二硝基水杨酸法测定植物组织中还原糖含量的原理和方法。 二、原理 3,5—二硝基水杨酸与还原糖共热后，被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内，还原糖的量和反应液颜色深浅成比例关系，用分光光度法可测知样品的含糖量。该方法为半微量定糖法，操作简便，快速，较少受其他杂质干扰。 三、材料、仪器设备及试剂 1.材料：马铃薯；水果类及其他植物。 2.仪器设备：分光光度计；电子分析天平；恒温水浴锅；试管 ；移液管；试管架；移液管架；研钵（或捣碎机）；洗耳球等。 3.试剂及配制： 3,5—二硝基水杨酸试剂（以下称DNS试剂）配制： A液— 称取6.9g结晶的重蒸馏的酚于15.2ml 10﹪氢氧化钠溶液中，并稀释至69ml，在此溶液中加入6.9g亚硫酸氢钠。此液为A液。 B液— 称取225g酒石酸钾钠，加入到300ml 10﹪氢氧化钠溶液中，再加入880ml 1﹪ 3.5— 二硝基水杨酸溶液，此液为B液。 将A液与B液相混合，即得黄色的DNS试剂，贮于棕色试剂瓶中。在室温下放置7—10d以后使用。 1mg·ml－1葡萄糖标准母液配制：准确称取0.1g分析纯无水葡萄糖溶于蒸馏水中，溶解后定容至100ml。 85﹪乙醇。 四、实验步骤 1. 葡萄糖标准曲线制作 1.1取7支25ml刻度试管，编号，按下表配制每管含量为0～1.2mg的葡萄糖标准液。 试 剂 管 号 0 1 2 3 4 5 6 1mg·ml－1葡萄糖标准母液（ml） 蒸馏水（ml） DNS试剂（ml） 0 2.0 1.5 0.2 1.8 1.5 0.4 1.6 1.5 0.6 1.4 1.5 0.8 1.2 1.5 1.0 1.0 1.5 1.2 0.8 1.5 每管葡萄糖含量（mg） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 加入表中试剂后，摇匀，放入沸水浴中加热5min，立即取出用自来水冷却，然后向每管加入21.5ml蒸馏水，使总体积为25ml,摇匀后，以0号管为空白对照，在520nm波长处测定吸光度（A）值。 1.2标准曲线绘制 以1～6管葡萄糖含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。 2.样品中还原糖的提取 称取发芽马铃薯10g，磨碎（或捣碎），加入85﹪乙醇50ml，混匀，在50℃恒温水浴中 保温30min（其间摇动数次），将上清液过滤到100ml容量瓶中，滤渣再用20ml 85﹪乙醇二次提取，一并过滤到容量瓶中，最后用85﹪乙醇定容至刻度，摇匀备用。 3. 样品中还原糖含量的测定 取4 支25ml刻度试管，编号，其中3支（三个重复）分别加入样品糖分提取液1ml及蒸馏水1ml，1支空白管加2ml蒸馏水，然后各管再加入DNS试剂1.5ml，摇匀，混合液在沸水浴中加热5min，然后用自来水冷却，各加入21.5ml蒸馏水使总体积为25ml，摇匀，在520nm波长处测定吸光度（A）值。 五、结果计算 根据样品液所测得的吸光度值，从标准曲线查出其相应的还原糖含量，然后按下公式计算出样品中的还原糖百分含量。 提取液总量（ml） 从标准曲线上查得还原糖(mg)×——————————— 测定时提取液用量（ml） 还原糖（﹪）= ———————————————————————————×100 样品重（mg） Ⅱ、蔗糖含量的测定 一、目的 掌握植物组织中蔗糖含量测定的原理和方法。 二、原理 植物体内可溶性糖包括还原糖和非还原糖（主要是蔗糖）。因此测定蔗糖时，须先用盐酸将其水解为还原糖，再测定水解后的总还原糖含量，然后从总还原糖含量减去水解前还原糖含量即为蔗糖含量。 三、材料、仪器设备及试剂 1.材料：马铃薯、水果类及其他植物材料。 2.仪器设备：分光光度计；电子分析天平；恒温水浴锅；25ml刻度试管；50ml容量瓶； 100ml三角瓶；试管架；移液管；移液管架；洗耳球；玻棒等。 3.试剂及配制 6mol·L－1盐酸溶液；10﹪