副溶血弧菌DPO-PCR检测方法的建立.pdfVIP

E据1I.I~遗盛圃 DOI: 10. 13995/j. cnki. 11 -1802/ts. 201511024 副溶血弧菌 DPO-PCR 检测方法的建立* 李丹丹l ，徐义刚2 ，王星3 ，邱索平4 ，高会江5 ，高慎阳6 1(海南出入境检验检疫局检验检疫技术中心，海南海口，570311) 2( 黑龙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心，黑龙江哈尔滨，150001 ) 3( 重庆出入境检验检疫局检验检疫技术中心，重庆，404100) 4( 从化出入境检验检疫局，广东广州，510900 月(中国农业科学院北京畜牧兽医研究所， 牛遗传育种研究室，北京，10019)6( 辽宁医学院畜牧兽医学院，辽宁锦州，121001) 摘 要 以副溶血弧菌( Vibrio parahaemolytic旧，VP)toxR 基因为靶基因设计了一对双启动寡核苦酸 (DPO) 引物，建 立了 DPO-PCR 快速检测 VP 的方法。结果显示，退火温度在 49 - 69 c都能有效地扩增出目的基因，表明该检测方法 对退火温度不敏感;该 DPO 引物仅与 VP 的扩增反应呈阳性，而与其他菌株无非特异性扩增反应，表明该方法特异性 强;该方法的灵敏度为 121 CFU/mL。利用该检测方法对采集的 550 份样品进行检测，共计检出 19 份 VP 阳性样品，与 行标法(SN/T 1870 - 21∞7) 检测结果一致，实用性良好。该 DPO-PCR 方法设计简单、特异性强，具有良好的实用性。 关键词 副溶血弧茵 ;toχR 基因; DPO-PCR 副溶血弧菌( Vibrio parahaemolyticus , VP) 是-种 PCR 方法更为精确。本研究利用该技术，建立了 VP DPO-PCR 快速检测方法，为有效检测 VP 提供技术 革兰氏阴性嗜盐菌，在海水养殖的牡蜘、虾和蟹等贝 支撑。 类、甲壳类水生动物中分布广泛，是流行程度、危害程 度最高的食源性致病菌之一[仁，人类进食被 VP 污染 l 材料和方法 的食品会引起急性胃肠炎，严重者还可引起败血 1. 1 材料 症[23] ，是国际公认的食物中毒病原菌，其引发的食 1. 1. 1 菌株及临床样品 源性疾病已成为当前全球面临的公共卫生问题之 空肠弯曲菌、肠出血性大肠埃希菌。157: H7 、单 一;4J 。近年来，我国沿海地区常发生由该致病菌感 核细胞增生李斯特菌、沙门氏菌、变形杆菌、阪崎肠杆 染引发的食源性中毒事件，该菌也是我国进出口水产 品检测的主要检测项目之一[5 - 6] 。目前，对 VP 的检 菌、粘质沙雷菌、创伤弧菌、志贺菌、金黄色葡萄球菌、 产肠毒素大肠杆菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、肠侵袭 测以传统的细菌分离培养、生化鉴定为主。传统的细 性大肠杆菌、霍乱弧菌和副洛血弧菌等标准菌株购自 菌鉴定方法特异性差、灵敏度低并且耗时长、操作繁 美国典型菌种保藏中心;副溶血弧菌分离株由本中心 琐、受环境及主观因素影响大。 双启动寡核昔酸引物( dual-priming oligo