实时荧光定量聚合酶链反应检测人类8型疱疹病毒载量方法的建立及其诊断应用.pdfVIP

·413· ● 基础论著 ● 实时荧光定量聚合酶链反应检测人类8型 疱疹病毒载量方法的建立及其诊断应用 王慧 惠艳 刘涛 刘文先 王俊华 卢晓梅 林仁勇 温浩 王星 Green 【摘要】 目的建立一种检测人类8型疱疹病毒(HHV-8)载量的SYBRI实时荧光定 量PCR(RT—qPCR)方法，并进行初步诊断应用。方法分别构建HHv_8开放阅读框(ORF)26和 内参照基因[3-actin重组T载体，制备质粒标准品。确定最佳实验条件，建立高灵敏度的RT—qPCR 方法。并检测30份经病理学确诊的卡波西肉瘤(KS)石蜡组织中HHV-8载量，初步评价其应用的 有效性。结果 明确了建立该法的最关键因素为退火温度和延伸环节。标准曲线参数良好，ORF26 和口-actin标准品Ct值与其相应梯度稀释标准品浓度呈良好线性关系(rzo．990)，扩增效率分别为 88．3％和90．3％。经熔解曲线和电泳分析，产物特异。30份KS样本中HHV-8ORF26的检出率 为100％。经典型KS中HHV一8载量显著高于AIDS相关型KS(均数分别为69．18和8．63，Z。一 7．950，P=0．005)。结论成功建立了灵敏度高的HHv_8实时荧光定量PCR检测方法，为临床诊 断可疑或感染病例提供了技术平台。 【关键词】疱疹病毒8型。人；反转录聚合酶链反应；肉瘤，卡波西；开放读码框架；荧光染 料；核酸类 andevaluationofareal—timefluorescent chainreactionfor Development quantitativepolymerase assay human viraIloadWANGH“i。，HUJY么n，LfU丁口o，LJUWen-xian， detectingIterpesviras-8 WANG Hao，WIANG Jun—hua，LUXiao-mei，LfNRen—yong，WENXing．’CentralLaboratoryof First Medical 830054，China Af舡liatedHospitalofXinjiang University，Urumuqi Correspondingauthor：WANGXing，Email：wanghui007007007@yahoo．corn．crl a fluorescent chain Toestablishreal—time polymerasereaction [Abstract]Objective quantitative ofhuman load．Methods detection (RT—qPCR)for Herpesvirus-8(HHV一8)viralpMDl9一T recombinantinsertedwithan frame(ORF)26ofHHV-8or were vectors openreading gene p_actin constructed sensitive methodwasestablishedand RT-qPCR optimized．Theeffectivity respectively．A ofthemethodevaluated theHHV-8viralloads