第7讲(萃取2).ppt

研究生课程 分离方法基础与技术 第 7 讲 第6章 萃取分离法 (下) 第6章 萃取分离法 上讲内容 6.1 基本概念 6.2 主要萃取体系 6.3 影响萃取的各种因素 6.4 溶剂萃取实验技术 本讲内容 6.5 胶体萃取 6.6 双水相萃取 6.7 固相萃取 6.8 超临界流体萃取 6.5 胶体萃取 1.基本概念 胶体（胶团）萃取—被萃取物以胶体或胶团形式被萃取。 胶体萃取也能用于无机物的分离，但应用较少。 如：氯仿（或CCl4）萃取胶体金； 乙醚或氯仿萃取胶体银或硫酸钡。 正向微胶团：在水溶液中加入表面活性剂达到一定浓度时，会形成表面活性剂聚集体（胶团），在这种胶团中，表面活性剂的极性头朝外（向水），而非极性尾朝内。 反向微胶团： 与正相微胶团相反， 当向非极性溶剂中加 入表面活性剂达到一 定浓度时，会形成憎 水非极性尾朝外（向 溶剂），而极性头（ 亲水基）朝内的胶团。 胶团大小在毫微米级。 生物物质对分离体系的要求严格 由于在分离过程中生物物质容易被破坏，很多通常的分离方法（如蒸馏）难以采用。 由于生物样品一般粘度较大，过滤和超滤等也困难。 由于生物物质（蛋白质）的亲水憎油性，使其难溶于一般有机溶剂；不适合通常的水相/有机溶剂相体系。 由于生物物质直接与有机溶剂接触会引起变性。应尽可能避免直接接触。 对生物物质萃取所用溶剂的要求 能溶解蛋白质并能与水分相，不破坏蛋白质生物功能。 反向微胶团对生物物质的溶解 反向微胶团中有一个极性核心，它包括了表面活性剂的极性头组成的内表面，平衡离子和水。此极性核心又称“水池（water pool）”，水池可以溶解极性分子，于是，极性的生物分子就可以溶于有机溶剂而不直接接触有机溶剂。 2. 蛋白质的溶解模型 水壳模型 蛋白质居于“水池”中心，水壳层则保护了蛋白质，使其生物活性不会改变。 陆九芳p125a 蛋白质亲水基插入 反向微胶团中 仅蛋白质的亲水基插入胶团内部的“水池”中，而其亲脂基团露在胶团外面，与表面活性剂的疏水剂或有机溶剂的碳氢部分接触。 陆九芳p125b 吸附模型 蛋白质分子吸附在胶团内部由表面活性剂亲水头组成的亲水壁上。 陆九芳p125c 溶解模型 蛋白质被几个胶团包围而溶解于表面活性剂胶团，胶团的非极性尾与蛋白质的亲脂部分直接作用。 陆九芳p125c 水壳模型是比较公认的蛋白质溶解机理 胶团中水含量（?0） “水池”中的水与正常水有所不同，特别是当?0相当低（如?010）时，其冰点通常低于00C。 蛋白质表面的电荷与微胶团内表面的电荷之间的静电作用对蛋白质的溶解起重要作用。 3. 影响胶团萃取的主要因素 表面活性剂和溶剂种类对胶团萃取的影响 表面活性剂多采用AOT（琥珀酸二(2-乙基己基)酯磺酸钠）? 阴离子表面活性剂 AOT作为反向微胶团的表面活性剂的优点： 所形成的胶团的含水率高（?0为50－60），比季铵盐高一个数量级以上； AOT形成反向微胶团时，不需要助表面活性剂。 有机溶剂通常采用异辛烷。表面活性剂AOT能迅速溶于有机溶剂，也能溶于水而形成液晶态（非球状）胶团。 水相pH值对胶团萃取的影响 蛋白质为两性分子，各种蛋白质有确定的等电点(pI)，当pHpI时，蛋白质荷正电，AOT为阴离子表面活性剂，所形成的反向胶团内表面荷负电，蛋白质分子与胶团内表面作用强，形成稳定的含蛋白质的微胶团。 当pHpI时，蛋白质分子和表面活性剂内表面都荷负电，相互排斥，蛋白质难溶于胶团中。 pH过低时，蛋白质会变质，溶解度也降低。 pH值对蛋白质溶解度的影响 离子强度增加，减小了蛋白质的表面电荷与微胶团内表面电荷的相互作用，从而降低蛋白质在胶团中的溶解度。 陆九芳p127－320 4. 胶团萃取分离过程 制备含蛋白质的反向微胶团的三种方法 相转移法：将含蛋白质的水相和含表面活性剂的有机溶剂相接触，在缓慢搅拌下，部分蛋白质转入有机相。此过程较慢，最终得到的含蛋白质有机相是稳定的。 注入法：向含表面活性剂的有机相中注入含蛋白质的水溶液。此过程较快，操作也很简单。 溶解法：适用于水不溶蛋白质。将含水的反向微胶团的有机溶液与蛋白质固体粉末一起搅拌。 制备含蛋白质的反向微胶团的三种方法 胶团萃取实例：胶团萃取分离3种蛋白质（核糖核酸酶、细胞色素C、溶菌酶） 表面活性剂：AOT；有机相：异辛烷 利用离子强度和pH值调节蛋白质的溶解度差异。 pH=9,[KCl]=0.1M时，核糖核酸酶不溶于胶团，留在水相。 进入有机相胶团中的细胞色素C和溶菌酶用pH=9,[KCl