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第八章 发酵下游过程简介 第一节 下游加工过程及技术 第二节 下游加工技术的选择及发展趋势 化学工业出版社 学习目标 了解发酵下游处理的一般过程。 了解常用的发酵下游分离技术。 下游加工过程 下游加工过程主要包括四个方面：①原料液的预处理和固液分离；②初步纯化（提取）；③高度纯化（精制）；④产品加工这四个步骤。其一般工艺过程如下: 第一节 下游加工过程及技术 发酵液的预处理和固液分离 发酵液中含有菌（细胞）体、胞内外代谢产物、残余的培养基以及发酵过程中加入其它一些物质等。发酵液的预处理和固液分离过程是下游加工的第一步操作。发酵液预处理的目的，就在于改变发酵液的性质，以利于固液分离及产品的捕集，有时还要考虑利于菌体的回收等。常用的预处理方法有酸化、加热、加絮凝剂等。 细胞破碎主要是用于提取细胞内的发酵产物。细胞破碎是指选用物理、化学、酶或机械的方法来破坏细胞壁或细胞膜，使产物从胞内释放到周围环境中的过程。 固液分离方法主要分为两大类：一类是限制液体流动，颗粒在外力场的作用下（如重力和离心力）自由运动。传统方法如浮选、重力沉降和离心沉降等。另外一类为颗粒受限，液体自由运动的分离方法，如过滤等。 初步纯化（提取） 吸附法 是指利用吸附剂与生物质之间的分子引力而将目标产物吸附在吸附剂上，然后分离洗脱得到产物的过程，主要用于抗生素等小分子物质的提取。 离子交换法 是指利用离子交换树脂和生物物质之间的化学亲和力，有选择地将目的产物吸咐，然后洗脱收集而纯化的过程，也主要用于小分子的提取。 沉淀法 是指通过改变条件或加入某种试剂，使发酵溶液中的溶质由液相转变为固相的过程。 溶剂萃取法 利用有机溶剂来实现水相中某种物质向有机溶液中转移的方法。由于蛋白质遇有机溶剂会引起变性，所以溶剂萃取法一般仅用于抗生素等小分子生物物质的提取。 双水相萃取 双水相萃取技术又称水溶液两相分配技术，是通过在水溶液中加入两种亲水聚合物或者一种亲水性聚合物和盐，到一定浓度时，就会形成两相，利用目标生物质在两相中分配不同的特性来完成浓缩和纯化的技术。 超临界流体萃取 利用超临界流体来提取液体或固体中某种组份的技术。超临界流体的密度和液体相近，粘度和气体相近，溶质在其中的扩散速度可为液体的100倍，这是超临界流体的萃取能力和萃取速度优于一般溶剂的原因。 超滤法 利用超滤膜作为分离介质对生物物质进行浓缩和提纯的过程。适用于超滤的物质分子量在500~1000000之间，或分子大小近似地在1~10nm之间。在小分子物质的提取中，超滤用于去除大分子杂质；在大分子物质的提取中，超滤主要用于脱盐浓缩。 高度纯化（精制） 色层分离 是一组相关技术的总称，又叫色谱法、层离法、层析法等，是一种高效的分离技术。操作是在柱中进行的，包含两个相——固定相和移动相，生物物质因在两相间分配情况不同，在柱中的运动速度也不同从而获得分离。 结晶 是指物质从液态中形成晶体析出的过程。结晶的前提条件是溶液要达到过饱和，可用的方法有： ① 加入某些物质，使溶解平衡发生改变，例如调pH； ② 将溶液冷却、加入其它溶剂或将溶剂蒸发等。 成品加工 浓缩 浓缩可以采用升膜或降膜式的薄膜蒸发来实现。对热敏性物质，可采用离心薄膜蒸发器，而且可处理粘度较大的物料。膜技术也可应用浓缩，对大分子溶液的浓缩可以用超滤膜，对小分子溶液的浓缩可用反渗透膜。 无菌过滤和去热原 热原是指多糖的磷类脂质和蛋白质等物质的结合体。注入体内会使体温升高，因此应除去。传统的去热原的方法是蒸馏或石棉板过滤。 干燥 是除去残留的水分或溶剂的过程。干燥的方法很多，如真空干燥、红外线干燥、沸腾干燥、气流干燥、喷雾干燥和冷冻干燥等。干燥方法的选择应根据物料性质、物料状况及当时具体条件而定。 第二节 下游加工技术的选择及发展趋势 下游加工过程特点 发酵液或细胞培养液中杂质复杂，它们的确切组分不十分清楚，这给下游过程设计造成很大困难。 产物起始浓度低，最终产品要求纯度高，常需应用多种分离技术，进行多步分离，致使产物收率较低，加工成本增大。 下游加工过程通常在十分温和的条件下操作，同时生产要尽可能迅速，缩短加工时间。 发酵和培养很多是分批操作，生物变异性大，各批发酵液不尽相同，这就要求下游加工设备有一定的操作弹性，特别是对染菌的批号，也要能处理。 某些产品在分离与纯化过程中，还要求无菌操作或除去对人体有害的物质。 下游加工过程的选择与设计 1.考虑因素 产物所存在的位置（细胞内或细胞外） 原料中产物和主要杂质浓度 产物和主要杂质的物理、化学及生物学特性的差异 产品的用途和质量标准等 生化分离过程自身规模和目标产物的商业价值 工艺要求。目标产物的纯度；提高每一步的收率；缩短流程和简化工艺过程，减少投资及运行成本；