基于16SrDNA序列的1株灭螺微生物的分子鉴定-江苏农业科学.PDF

— １６— 江苏农业科学　２０１７年第４５卷第１期 崔国艳，程红兵，何　鑫，等．基于１６ＳｒＤＮＡ序列的１株灭螺微生物的分子鉴定［Ｊ］．江苏农业科学，２０１７，４５（１）：１６－１９． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１７．０１．００５ 基于１６ＳｒＤＮＡ序列的１株灭螺微生物的分子鉴定 １ １ ２ ３ ２ ２ 崔国艳 ，程红兵 ，何　鑫 ，彭交凤 ，闾丘思嘉 ，黄成铭 （１．长治医学院微生物教研室，山西长治０４６０００；２．中南大学湘雅医学院病原生物教研室，湖南长沙４１００７８； ３．长沙金城医学检验所有限公司，湖南长沙４１００７８） 　　摘要：从湖南省汨罗市血吸虫防治基地土壤中分离得到１株灭螺活性较强的微生物菌株 Ｂ５９，以Ｂ５９菌株的总 ＤＮＡ为模板，采用细菌１６ＳｒＤＮＡ通用引物进行ＰＣＲ扩增并测其核酸序列，得到１条约１５００ｂｐ的片段。通过Ｂｌａｓｔ 软件在ＧｅｎＢａｎｋ中进行同源性检索，将其与同源性较高的菌株的ＩＴＳ序列进行ＣｌｕｓｔａｌＸ序列差异和同源性分析，分别 使用ＭＥＧＡ６．０软件中的邻接法、Ｐｈｙｌｉｐ软件中的最大简约法及最大似然法构建系统发育树。结果显示，３种方法构 建的系统发育树基本一致，Ｂ５９菌株与Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓ的亲缘关系最近，聚为一支，相似度达１００％。 　　关键词：钉螺；微生物；１６ＳｒＤＮＡ；系统发育树 ＋ 　　中图分类号：Ｒ３８３．２４；Ｓ１８２　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１７）０１－００１６－０３ 　　血吸虫病是一种严重危害人类公共健康和社会经济发展 １．１．１　供试菌株　Ｂ５９菌株是从湖南省汨罗市血吸虫病防 的人兽共患寄生虫病，主要流行于非洲、东南亚等国家，每年 治研究试验基地的螺池土壤中分离纯化得到，由笔者实验室 ［１］ 有６９０万～７５０万人被感染 ，虽然目前在我国得到了很好 保存。 的控制，但是日本血吸虫病仍然被政府认定为４种高度传染 １．１．２　主要试剂和仪器　２×ＴａｑＭａｓｔｅｒＭｉｘ、ＤＮＡｍａｒｋｅｒ 病之一［２－３］，甚至在许多地区，服用大剂量吡喹酮后的人群再 （ＤＬ２０００），均购自宝生物工程（大连）有限公司；细菌基因组 ［４］ 感染率仍大于２０％ 。湖北钉螺是日本血吸虫唯一的中间宿 ＤＮＡ提取试剂盒，购自天根生化科技（北京）有限公司；引物 ＴＭ 主，是造成日本血吸虫病流行的重要根源。据统计，截至２０１３ 由北京鼎国昌盛生物技术有限公司合成；ＭｙＣｙｃｌｅｒ ｔｈｅｒｍａｌ 年底血吸虫病流行县（市、区）比２０１２年新增２个，达到４５４ ｃｙｃｌｅｒＰＣＲ仪，购自美国Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司；ＵＶＰ－ＧＤＳ８０００凝胶 ［５］ 个，总人口为２．４９亿人，血吸虫病的流行村有３０３５２个 。因 成像分析系统，购自美国ＵＶＰ公司；ＰｏｗｅｒＰａｃＵｎｉｖａｒｓａｌ电泳 此，控制钉螺以打破寄生虫的生活史是目前全国控制血吸虫病 仪，购自美国Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司；Ｈ１８５０Ｒ台式高速低温离心机， ［６］ 的比较重要和有效的措施 。但是由于复杂的经济、社会、环 购自湖南湘仪动力测试仪器有限公司。 境和生物等因素的影响，目前仍不确定控制钉螺最经济有效的 １．２　试验方法 方法。目前控制钉螺的方法主要有３种，即物理灭螺、化学药 １．２．１　菌体培养　供试菌株在ＬＢ斜面培养基上活化培养 物灭螺和生物生态灭螺。微生物灭螺由于其稳定、高效，对非