模拟微重力条件下大鼠肝细胞的三维培养及其功能3.PDF

动物学报 　48 (6) :770～776 , 2002 A cta Zoologica S inica 　　　　　 　 模拟微重力条件下大鼠肝细胞的 三维培养及其功能 江青艳　张守全　劳全林　高淑静　傅伟龙 (华南农业大学动物科学学院 , 广州 510642) 摘 　要 　采用肝脏原位灌流法分离大鼠肝细胞 , 以血纤维蛋白膜作支架, 在 RWVB 回转器提供的模拟微重力条 件下 , 对肝细胞进行三维培养。肝细胞经连续培养 28 d 后 , 细胞仍呈球状 , 并获得了三维培养条件下大鼠肝细 ( ) 胞团 约为 200～300 个/ 细胞团 。三维培养的肝细胞在培养期间具有持续分泌ALB 和 TBA 的功能 , 而单层培 养的肝细胞仅在接种后 18 d 内具有一定分泌功能, 之后细胞逐渐衰老死亡。三维培养的肝细胞培养至 28 d 时仍 可检测到 G6PD 、PF K 、PGM 三种糖代谢关键酶基因的转录 , 而单层培养的肝细胞在接种后第 6 d 就检测不到 PF K 、PGM 的转录。结果表明 , 模拟微重力条件下三维培养的肝细胞在培养期间不仅能维持正常细胞形态 , 而 且具有稳定的分泌功能和糖代谢功能 , 而单层培养的肝细胞分泌功能显著下降 , 糖代谢功能出现异常。 关键词 　大鼠 　肝细胞 　模拟微重力 　三维培养 　　微重力组织工程 ( Microgravity Tissue Engi 1 　材料与方法 neering) 是 90 年代中期由美国空间生物技术研究 人员开创的一个独特研究领域 , 其核心技术是建立 11 　试剂 ( ( ) 动物细胞的三维培养体系 Freed et al . , 1995 , RPM I 1640 培养基 Gibco 公司 、Ⅳ型胶原 ) ( ) 1997a 。1995 年 Freed 等首次建立了模拟微重力条 酶和 RNA 提取试剂盒 Promega 公司 、HEPES ( ) ( 件下小牛软骨细胞的三维培养模型 , 并获得了与体 和胰岛素 Sigma 公司 、胎牛血清 Hyclone 公 ) ( ) 内软骨组织形态和功能相似的结构。此后, 研究者 司 、EX Taq 酶、RNasin RNA 酶 抑 制 剂 、 ( ) 们在一系列的细胞三维培养研究中先后取得重要进 AMV 逆转录酶和 Marker Takara