我国南方野生狗牙根遗传多样性RAPD分析.docVIP

我国南方野生狗牙根遗传多样性RAPD分析 　摘　要：对采自我国南方不同地区的25份野生狗牙根〔Cynodon dactylon (L.) Pers.〕进行了RAPD 分子标记分析。选用18个引物共扩增出151条带，平均每个引物扩增出8.4条带，其中多态性带136条，多态带百分率达到90.17%，材料间遗传相似性系数在0.520~0.821之间。供试材料可聚为4类。聚类分析结果表明：25份狗牙根居群间的亲缘关系与地理分布有一定的相关性。 关键词：狗牙根； 遗传多样性； RAPD标记 狗牙根（dactylon (L.) Pers.）是世界著名的暖季型草坪草之一，主要应用在我国热带、亚热带地区[1]。目前，我国栽培利用的狗牙根品种主要由美国引进。在我国南方省区，气候类型多样，生境各异，蕴藏着丰富的狗牙根基因资源。因此，系统收集、鉴定、评价我国野生狗牙根资源，研究其遗传多样性对于筛选优异种质、选育抗逆性状与坪用性状俱佳的狗牙根品种具有重要的现实意义。 Beckmann＆Soller（l986）认为，利用DNA分子标记进行遗传学研究是理解遗传传递的最强有力的途径，是形态性状、细胞学特征、生化标记等方法无法比拟的。近年来，利用DNA分子标记对野生狗牙根资源的遗传多样性研究已有不少。国外， DAMD、RAPD、AFLP、CpSSRLP已被用于检测当地野生狗牙根居群的遗传多样性[3~5]。国内，袁长春等（2003）、郑玉红等(2005)分别利用RAPD标记分析了湖南四种尾矿环境下的狗牙根遗传多样性和6份狗牙根选系的遗传关系[6, 7]。刘伟等（2007）[8]、易杨杰（2008）[9]、齐晓芳等（2010）[10]分别采用ISSR、SRAP和AFLP分子标记技术对我国西南地区野生狗牙根种质资源进行了遗传变异研究。本试验采用拟RAPD分子标记方法对25份我国南方狗牙根种质进行遗传多样性分析，以期为我国野生狗牙根种质资源的保护与开发利用提供参考。 1材料与方法 1.1供试材料 采自我国南方地区不同生境条件的25份野生狗牙根材料（见表1），种植于四川农业大学教学科技园牧草与草坪草资源圃。 表1 供试野生狗牙根材料 Table 1. C. dactylon accessions used for RAPD analysis 序号编号来源序号编号来源 1Sau99005四川广元14Sau9945重庆长寿 2Sau0098四川攀枝花15Sau9947重庆嘉陵公园 3Sau02014四川金川16Sau02021贵阳小河 4Sau02011四川汶川17Sau02023贵州独山 5Sau9933四川汶川18Sau02027云南小哨 6Sau9934四川汶川19Sau02054云南巧家 7Sau02064四川芦山20XZ2西藏察隅 8Sau02066四川芦山21XZ5西藏察隅 9Sau02001四川绵阳22Sau02008江西都昌 10Sau9951四川南充23Sau2000105海南三亚 11Sau9928四川宜宾24Sau2000106海南湛江 12Sau9925四川宜宾25Sau2000107海南万全河 13Sau02069四川洪雅 1.2试验方法 叶片基因组总DNA提取采用改进CTAB法[11]，RAPD反应程序及反应体系参见梁慧敏[12]并适当调整，总体积20 μl，其中含1×PCR buffer （10 mmol/L Tris-HCl pH8.3, 50 mmol/L KCl, 0.001% gelatin），1.8 mmol/L MgCl2，dNTPs 200 umol/L，0.2 umol/L引物（北京赛百盛生物工程公司），20~50 ng模板DNA，1U Taq DNA聚合酶(成都博瑞克公司)。反应在MJ Research Inc. PTC-200扩增仪上进行。扩增程序：94 ℃ 预变性 3 min；94 ℃ 变性 1 min；36 ℃退火1 min ；72 ℃延伸 2 min，45个循环；最后72 ℃延伸10 min。电泳时，以1×TBE为缓冲液，将扩增产物在含有0.5 g/L的溴化乙锭(EB)的1.4%琼脂糖凝胶电泳中以5 V/cm的电压电泳分离，Gel Doc 2000TM (Bio-Rad)凝胶成像仪上观察照像、记录。 1. 3数据统计分析 对18个完全扩增引物的电泳结果进行量化，有谱带记为1，无谱带记为0，统计多态性位点，计算多态位点百分率、遗传相似系数。根据GS值或遗传距离(1-GS)按不加权成对群算术平均法(UPGMA)进行遗传相似性聚类[13]。统计分析在NTSYS-pc2.1软件下进行。 2结果与分析 2.1RAPD标记多态性 用生境和形态差异较大的野生狗牙根材料引物进行筛选，从中筛选出能产生清晰扩增