猪乙型脑炎诊断技术.docVIP

猪乙型脑炎诊断技术 　摘　要：猪乙型脑炎目前无特效的治疗方法,所以对其进行快速、准确的诊断意义十分重大。本文对猪乙脑的三种诊断方法：病毒的分离和鉴定、血清学诊断、分子生物学诊断技术进行一般性的阐述，并对其优缺点进行比较。 关键词：猪乙型脑炎；诊断技术；病毒 　　猪乙型脑炎即流行性乙型脑炎（epidemic encephalitis B）又称日本乙型脑炎（Japanese encephalitis），简称乙脑，是由流行性乙型脑炎病毒（日本乙型脑炎病毒）引起的一种蚊媒性人畜共患的传染病。本病为自然疫源性疾病，猪是其主要的储存和扩散宿主。带毒猪是该病的主要传染源，并通过蚊虫叮咬而传播，故乙型脑炎病毒感染呈猪-蚊-人连锁链。其病毒（JEV）属于黄病毒科（Flaviviridae）黄病毒属（Flavivirus），JEV主要引起妊娠母猪突发流产，死胎或木乃伊胎；公猪多发生一侧性睾丸炎；育肥猪持续高热。本病不仅对养猪业造成了巨大的经济损失, 而且严重威胁着人类的健康。猪乙脑目前无特效的治疗方法，而且病毒可经胎盘垂直传播，感染猪可长期带毒，所以对其进行快速、准确的诊断意义十分重大。[1-3]以下对各种诊断方法进行概述： 　1．病毒的分离与鉴定 在本病的流行初期，可采集母猪流产死胎和库蚊为病料，用乳鼠脑内接毒和细胞接毒培养相结合的方法盲传并分离病毒，可采用标准毒株和标准免疫血清进行交叉补体结合试验、交叉中和试验、交叉血凝抑制试验、酶联免疫吸附试验、小鼠交叉保护试验、RT-PCR等鉴定病毒。汤德元的实验结果表明所分离的CQRC-1和SCNJ-1均为乙脑病毒。郑浩等采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测到猪流产胎儿病料中的JEV。 　2．血清学诊断技术 　2.1血清学方法1）补体结合试验(complement fixation test,CFT)。补体结合试验的特异性都较高，以可溶性猪乙脑抗原与相应的抗体特异性结合成抗原-抗体复合物后，能与定量补体全部或部分结合，不再引起指示系统的红细胞溶血，结果阳性；如果抗原与抗体不相适应，则不能结合补体，补体反过来使指示系统的红细胞溶血，结果阴性。2）中和试验(serum neutralization test,SN)。利用乙脑病毒与其抗体结合，使其失去吸附细胞的能力，或抑制其侵入和脱壳，失去感染能力，通过比较免疫血清和正常血清中和后的毒价，进而对乙脑病毒进行判定。本试验在人方面应用较多，但在诊断猪乙脑方面较少应用。3）血凝抑制试验(HI)。抗乙脑病毒感染的免疫主要靠体液免疫。猪感染本病后3d即可产生特异性IgM抗体，2周后可以达到高峰，因此可以测定血清中IgM抗体，达到早期诊断的目的。该方法敏感性高且便捷，是早期诊断常用的方法之一，因其操作简便对材料要求不高，故适用于基层使用。 　2.2免疫荧光技术(immunofluoresecence technique,IFT)免疫荧光技术利用化学方法将荧光素结合到提纯的抗体分子上，形成的荧光抗体仍然具有与特异性抗原结合的能力，在荧光显微镜下可以对抗原进行定位和定性的测定。目前拥有的免疫荧光技术包括直接免疫荧光法，间接免疫荧光法和微量免疫荧光法。间接免疫荧光法测猪乙脑特异性IgM抗体，具有快速敏感的特点。 　2.3乳胶凝集试验(latex agglutination test,LAT)本试验以乳胶颗粒作为载体的一种间接凝集实验。在其表面吸附猪乙脑抗原，特异性抗体与之相结合产生凝集反应。乳胶凝集试验试剂盒已广泛应用于实际生产中。 　2.4微孔杂交法(PCR-ELISA)该方法是通过固定于微孔板的捕获探针与PCR产物的某特定区域特异性杂交，使产物间接固定在微孔板上，再用生物素等非放射性标记物标记的检测探针与产物的另一特异性杂交，漂洗后显色即可判断结果。徐晓立等利用该方法通过在5端标记生物素，DNA的标记、预杂交、标记、杂交、酶联显色等步骤，初步建立了检测乙脑的检测方法，为乙脑的诊断提供了新的方法。 　 2.5免疫胶体金技术(immunocolloidal gold technique)免疫胶体金技术是以胶体金标记抗体检测组织切片或细胞标本中的相应抗原或受体的方法。赵中夫等运用该方法建立了一种可以用于现场快速检测流行性乙型脑炎病毒的胶体金免疫层析方法。可能是成本原因本方法并未在诊断猪乙脑上进行广泛应用。 　2.6酶联免疫吸附试验(enzyme linked-immunosorbent assay，ELISA)ELISA试验是将抗原或抗体吸附于固相载体上，在固相载体上进行免疫酶染色，底物显色后用肉眼或酶联免疫测定仪判定结果的一种方法。这是一种敏感性高，特异性强且设备要求简单的方法，也是当前发展最快，应用最广的一种方法。目前针对猪乙脑病毒已建立并完善