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东北农业大学本科实验课程教学大纲 实验课名称 生物显微技术 实验课英文名称Biological Microscopy 一、理论课程（或实验课程）课号 适用专业：生工、生技、生科(本硕博)、生科(四) 理论课程总学时：18 实验总学时（周学时）：30 学分：1.5 开出实验个数：（验证实验 0个；综合实验 4 个；设计实验 0 个；创新性实验 0 个） 应开实验学期：5学期 二、实验课程简介 生物显微技术是高等学校生物系各专业的基础课，是在组织、细胞、亚细胞水平研究生物结构与功能关系的一系列实验技术的总称。课程内容包括：动植物显微切片的制作、组织化学以及在组织化学基础上发展的免疫组织化学和原位杂交技术。同时，还包括这些技术相关的光学显微镜，电子显微镜及附属用具所必备的基本理论，基本知识和基本技术。 三、实验教学目标及基本要求 本课程的教学目的是使学生了解生物显微技术的基础理论和基本知识，并在实验课程中锻炼动手能力和分析解决问题能力，为毕业实习及以后的科研、生产工作打下基础。通过本课程理论部分的教学，要求学生了解光学显微镜、各种电子显微镜的原理、特点及在生物学中的应用；了解各种动物组织切片的制作的原理和方法；掌握组织化学常用染色原理和方法；理解免疫组织化学的原理和主要方法；了解原位杂交的原理。在试验技能方面要求学生达到：熟悉光学显微镜的结构与用途，熟悉并使用光学显微镜，掌握组织化学的操作技能，对免疫组织化学试验设计、结果分析有一定的了解。 四、教材及主要参考书 1．生物显微技术实验指导 倪华 东北农业大学校内教材 2004年 2．细胞生物学实验指导 汪德耀 高等教育出版社， 五、考核办法 实验报告成绩计分。 大纲主撰人：倪华 （一）实验项目1大鼠组织的石蜡包埋及切片 1．实验特点 实验类型：专业基础 实验类别：综合 计划学时：14 每组人数：5 首开日期：2001.5 说明：实验类别指基础、专业基础、专业 实验类型指验证、综合、设计。 每组人数指教学实验项目中在每套仪器设备上完成本实验项目的人数。 2．实验目的与要求 1）熟悉动物组织取材、固定、石蜡包埋的方法及注意问题。 2）掌握石蜡切片技术操作。 3．主要仪器设备 序号 主要仪器设备名称 型号规格 数量 1 石蜡切片机 ZD-12 6 2 恒温展片台 CAU-2 6 3 自动磨刀机 ZMD-Ⅱ 1 4 恒温干燥箱 DHG9123A 6 4．实验内容提要 1） 玻璃载片的清洁和硅化处理 2）大鼠的处死，各种组织的取材、固定，应用包恩氏液和冰丙酮两种方法固定。 3）固定组织的脱水和透明 4）石蜡包埋 5）石蜡切片的制作 5．实验操作要点 小鼠处死后，尽快固定，固定要完全，但不要过度。脱水要完全，否则石蜡浸入不透，切成切片后片子上有空洞。 6．注意事项 透明时用二甲苯有挥发性，对人体有害，应注意通风，不应随意乱倒，污染环境。对学生进行实验安全教育。 切片刀非常锋利，学生操作时应小心。 使用显微镜时严格按规范使用，爱护仪器设备。 （二）实验项目2苏木精-伊红染色 1．实验特点 实验类型：专业基础 实验类别：综合 计划学时：4 每组人数：5 首开日期：2001.5 说明：实验类别指基础、专业基础、专业 实验类型指验证、综合、设计。 每组人数指教学实验项目中在每套仪器设备上完成本实验项目的人数。 2．实验目的与要求 1）掌握苏木精-伊红染色原理以及操作。 2）掌握分色操作。 3．主要仪器设备 序号 主要仪器设备名称 型号规格 数量 1 显微镜 Leica ,BME 12 2 电热恒温鼓风干燥箱DHG9123A 6 3 染缸 50 4．实验内容提要 1） 实验1所得石蜡切片，二甲苯脱蜡2次后下行酒精入水。 2）苏木精染色10分钟，PBS洗3次 3）0.1%HCI中分色1秒，1%氨水发明；反蓝 4）伊红中染色5分钟PBS洗3次。 5）显微镜下观察，封片保存。 5．实验操作要点 分色是关键。既要苏木精染色鲜艳，又要伊红不能覆盖苏木精。 6．注意事项 1）透明时用二甲苯有挥发性，对人体有害，应注意通风，不应随意乱倒，污染环境。对学生进行实验安全教育。 2）使用显微镜时严格按规范使用，爱护仪器设备。 （三）实验项目3 内源性碱性磷酸酶的检测 实验类型：专业基础 实验类别：设计 计划学时：4 每组人数：5 首开日期：2001.5 说明：实验类别指基础、专业基础、专业 实验类型指验证、综合、设计。 2．实验目的与要求： 掌握酶组织化学的原理； 熟悉组织化学的操作及注意事项； 3．主要仪器设备 序号 主要仪器设备名称 型号规格 数量 1 显微镜 Leica ,BME 12