Mitf和Pax6基因在小鼠胚胎干细胞向RPE细胞分化过程中表达的初步研究.docVIP

DOI: 10.16016/j.1000-5404. 201501041 Mitf和Pax6基因在小鼠胚胎干细胞向RPE细胞分化过程中表达的初步研究 吴昊芊1，彭广华2，阴正勤1 （400038重庆，第三军医大学西南医院：全军眼科中心,视觉损伤与再生修复重庆市重点实验室1；100853北京，解放军总医院眼科2） [摘要] 目的 探讨Mitf和Pax6基因在小鼠胚胎干细胞（embryonic stem cell，mESC）向视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium，RPE）分化过程中的表达规律及其作用。 方法 免疫荧光染色、流式细胞仪检测分化前小鼠胚胎干细胞株在不同代数的干性标志表达情况。采用悬浮培养加诱导剂形成拟胚体（embryoid bodies，EBs）的方式诱导mESC向RPE细胞分化，在分化前Day0，分化后Day10、40运用流式细胞仪检测Mitf和Pax6的在细胞中的表达规律及其与mESC向RPE细胞分化的关系。 结果 小鼠胚胎干细胞株AB1在持续传代过程中形态一致且其干性标志SSEA1表达比例在不同代数之间差别无统计学意义（P0.05）。分化所得细胞的RPE细胞成熟标志Bestropih、CRALBP、RPE65的表达比例分别为（61.6±2.4）%、（31.0±3.9）%、（57.8±2.0）%。在分化前Day0，Mitf、Pax6的表达比例分别为（1.7±1.5）%、（6.5±0.2）%。分化后Day10分别为（28.5±7.2）%、（60.2±15.6）%。分化后Day40分别为（5.7±2.1）%、（4.6±0.6）%。在mESC向RPE细胞的分化过程中，Mitf和Pax6均呈先上升后下降的趋势。 结论 Mitf和Pax6参与了RPE细胞的分化过程。 [关键词] 胚胎干细胞；分化；视网膜色素上皮细胞；Mitf；Pax6 [中图法分类号] [文献标志码] A [基金项目] 国家重点基础研究发展计划（973计划，2013CB967001） [通信作者] 阴正勤，E-mail:yzhengqin@163.com 彭广华，E-mail: peng63088@163.com Involvement of Mitf and Pax6 transcription factors in differentiation of mouse embryonic stem cells to retinal pigment epithelium Haoqian Wu1,Guanghua Peng2,Zheng Qin Yin1（1Department of Ophthalmology, Southwest Hospital, Third Military Medical University, Chongqing, 400038, China;2Department of Ophthalmology, Chinese PLA General Hospital, Medical School of Chinese PLA, Beijing, 100853） [Abstract] Objective To explore the possible involvement of transcription factors Mitf and Pax6 in differentiation of mouse embryonic stem cells(ESCs) to retinal pigment epithelium(RPE). Methods The cell marker of ESCs SSEA1 was stained with immolunofluorescence and analyzed by fluorescence activated cell sorter (FACS) during the differentiation of ESCs to RPE. The serum-free embryoid body-like (SFEB) culture was performed to differentiate mouse ESCs into RPE. FACS was used to analyze RPE precursor marker Mitf and Pax6 before differentiation (Day 0)，during differentiation (Day 10, Day 40). Results During passaging, the morphology of