2015年-核酸分子杂交11-10.ppt

* 待测RNA样品 ↓← 单链DNA探针（M13体系合成） 液相杂交 ↓ DNA-RNA杂交双链 ↓←核酸酶S1（专一降解未杂交的DNA和 ↓ RNA单链） 酶解 ↓ 杂交体系纯化 ↓ 脲-聚丙烯酰胺凝胶电泳 ↓ 放射自显影 2、杂交过程 * Home * 五、生物芯片 生物芯片（biochip）是近年来在生命科学领域中迅速发展起来的一项高新技术，它主要是指通过微加工技术和微电子技术在固体芯片表面构建的微型生物化学分析系统，以实现对细胞、蛋白质、DNA以及其他生物组分的准确、快速与大信息量的检测。 * Biochips Gene chip, DNA chip, DNA microarray Protein chip Lab-on-a-chip (缩微芯片实验室） * （一）DNA芯片技术的基本原理 DNA芯片技术的基本原理是大规模集成的固相核酸分子杂交，与Southern杂交和Northern杂交同出一理，即DNA的碱基互补配对和序列互补原理。 * 据芯片的制备分为： 1）原位合成芯片 2）DNA微集阵列（DNA microarray) 据DNA芯片上微排列的DNA不同分： 1）寡核苷酸芯片 2）cDNA芯片 （二）DNA芯片的类别 * 芯片方阵的构建 样品制备 生物分子反应 信号的检测及分析 （三）DNA芯片技术流程 * DNA芯片技术流程 Biological Sample Analyze data Scanner microarray “Hybridize” arrayer Microarray fabrication Sample preparation Molecular hybridization Detection and analysis * * 可在基因组水平进行基因表达和发现研究、突变、序列测定等，已方泛应用于基因组研究和人类疾病的诊断等多领域。 （四）DNA芯片应用 * 核酸分子杂交的流程示意图 待测核酸制备 滤膜上核酸固化 去除未参与杂交的探针 检 测 杂 交 信 号 制备探针核酸片段 探 针 标 记 杂 交 加入标记核酸探针 * 基因工程：用探针进行菌落杂交，可从cDNA文库或基因组文库中筛选出特定的克隆，获得某一重组体。 染色体定位：对某一已知基因或已克隆测序的基因可利用该技术进行染色体定位。 基因诊断：先天性遗传病，后天基因突变引起的疾病及肿瘤的基因水平研究等。 病原微生物的检测 其它：如DNA指纹、个体识别，亲子识别，法医物证，器官移植，组织配型等。 核酸分子杂交技术的应用 * * * * * mRNA的选择剪接是指真核细胞基因表达所转录出的前体mRNA的剪接过程中，参加拼接的外显子可以不按其在基因组的线性分布次序拼接，内含子也可以不被切除而保留，即一个外显子或内含子是否出现在成熟的mRNA中是可以选择的。这种剪接称mRNA选择剪接。 * 意义:在高等生物细胞的高度异质性中起重要作用。由于剪接的多样化，一个基因在转录后通过mRNA前体的剪接加工而产生两个或更多的蛋白质。 * * * F-ΚB是一种多效性很强的转录因子；实际上有人推测它是一种常见的第二信使。细胞受到的多种刺激都能使NF-ΚB活化；而ΚB结合位点的产生也能激活多种基因的转录。我们还不了解基因族中所有成员的活性。v-rel中发生的何种改变使它具有致癌性，以及它们怎样影响被Rel相关蛋白对转录的调节仍不清楚。一种可能是v-rel产物与细胞家庭成员形成无活性的二聚体，由此v-Rel阻碍了NF-ΚB