甜菜trap-pcr反应体系的建立及引物开发策略-中国农学通报.pdfVIP

中国农学通报 2016,32(6):96-101 Chinese Agricultural Science Bulletin 甜菜TRAP-PCR反应体系的建立及引物开发策略 1,2,3 1,2,3 1 1 1,2 吴则东 ，刘乃新 ，秦浩东 ，倪洪涛 ，马龙彪 1 （黑龙江省普通高校甜菜遗传育种重点实验室/黑龙江大学，哈尔滨150080； 2 黑龙江大学农作物研究院，哈尔滨150080； 3 农业部糖料产品质量安全风险评估实验室/ 中国农业科学院甜菜研究所，哈尔滨150080） 摘 要：以糖用甜菜为材料，利用单因素实验探讨甜菜TRAP-PCR 反应体系中dNTPs 、引物、模板以及 DNA 聚合酶等4 个因素的浓度变化对扩增结果的影响，最终建立糖用甜菜的最佳TRAP-PCR 反应体 系。结果表明，在20 μL 反应体系中，甜菜TRAP-PCR 最优反应体系包含2.0 μL 的10×PCR buffer（含 Mg2 + ）、10 ng 的模板DNA 、0.75 U 的Taqase 、10 μmol/L 固定引物及随机引物各0.8 μL 以及0.5 μL 的 dNTPs (2.5 mmol/L each) 。并建立了一种快速开发甜菜TRAP-PCR 引物的方法，利用优化后的程序对 15份糖甜菜品种进行扩增。结果表明，该体系扩增结果稳定、条带清晰，部分引物多态性丰富，可用于 糖用甜菜品种指纹图谱的构建以及其他分子生物学领域的研究。 关键词：糖用甜菜；TRAP-PCR ；体系优化；引物开发策略 中图分类号：S566.3 文献标志码：A 论文编号：cas EstablishmentofTRAP-PCRReactionSystemandDevelopmentStrategyofPrimersforBeet 1,2,3 1,2,3 1 1 1,2 WuZedong ,LiuNaixin ,QinHaodong,NiHongtao,MaLongbiao 1 (KeyLaboratoryofSugarBeetGeneticBreeding/HeilongjiangUniversity,Harbin150080; 2CropAcademyofHeilongjiangUniversity,Harbin150080; 3LaboratoryofQualitySafetyRiskAssessmentforSugarCropsProducts,MinistryofAgriculture,P.R.China/ SugarBeetResearchInstituteofChineseAcademyofAgriculturalSciences,Harbin150080) Abstract:Withsugarbeetasthematerial,theinfluenceofconcentrationchanges ofthefourfactorsofdNTPs, primer,templateandDNApolymeraseinthebeetTRAP-PCRreactionsystemontheamplificationresultswas discussedwithsingle-factorexperiment,andfinallytheoptimalTRAP-PCRreactionsystemofsugarbe