CaveoliN-1调控表皮生长因子受体活化抑制乳腺癌细胞增殖和迁移.pdfVIP

中文摘要 Caveolin．1调控表皮生长因子受体活化 抑制乳腺癌细胞的增殖及迁移 摘 要 目的：乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，其发病率已跃居女性恶性肿 瘤的第一位。最新统计报告显示，全球乳腺癌的发病率和死亡率逐渐上升， 年死亡人数大约40万人。因此，进一步研究乳腺癌的发生、发展机制具 有重要意义。 factor 表皮生长因子受体(epidermalgrowth tyrosine 氨酸激酶受体(receptor 移和存活中发挥重要作用，它们的调控异常与肿瘤的发生、发展有密切的 关系。已有报道，HER．2基因扩增和／或蛋白过度表达与乳腺癌的增殖和 浸润密切相关，目前已经公认HER．2表达与否是判断乳腺癌预后的一个 重要指标。HER．2形成二聚体后，分子中酪氨酸磷酸化可使受体活化，进 而激活细胞内一系列信号转导通路，参与肿瘤细胞的增殖和分化等。目前 针对HER．2的分子靶向药物已经用于临床治疗乳腺癌，但其单独应用有 效率非常低，提示在HER．2过表达的乳腺癌中可能还有其它的分子在 HER．2启动的致癌信号通路中发挥重要作用。因此，探索更为有效的乳腺 癌治疗新靶点具有重要的意义。 有研究发现EGFR也是一种与乳腺癌预后不良相关的标志性分子。 breast negative 结合后，通过受体二聚体化和相互磷酸化激活受体蛋白激酶，导致胞内酪 氨酸激酶区域上的酪氨酸磷酸化，进而激活ME舳RK及其下游信号传导 通路，促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。通过阻断EGFR启动的信号 通路将有助于抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移。 白，它广泛参与细胞的多种生命活动，主要通过磷酸化／去磷酸化途径与 多种信号分子相互作用，调控细胞的转化、增殖、迁移和浸润等。已有研 中文摘要 能直接与HER-2结合并抑制其磷酸化?目前尚未见报道。 HER-2磷酸化(活化)及其下游信号通路对乳腺癌细胞增殖的影响。 方法： l 细胞培养 的1 MDA．MB．436、SI∞R．3细胞。 2 明胶酶谱法检测不同乳腺癌细胞的侵袭能力 内待细胞长满至培养皿的80％．90％，用无胎牛血清的1640培养基饥饿培 养24小时，收集上清，应用明胶酶谱法测定不同乳腺癌细胞中MMP2、 MMP9蛋白的活性，了解不同乳腺癌细胞的侵袭能力。 3细胞划痕修复实验检测不同乳腺癌细胞的迁移能力 胞密度为90％左右，饥饿培养细胞4小时，用无菌200ul移液器吸头在培 养皿底部划一条直线，分别于6小时和12小时后观察划痕愈合宽度的变 化，计算细胞迁移率。 4 Western 表达 满至培养皿的80％左右，用无胎牛血清的1640培养基饥饿培养4小时， 收集细胞提取总蛋白，采用免疫印迹(WesternBlot)法测定不同乳腺癌 细胞中Caveolin．1、EGFR、HER．2蛋白的表达情况。 5 荧光羊抗兔IgG的荧光二抗，进行免疫细胞荧光染色，激光共聚焦显微镜 水平的影响 中文摘要 siRNA质粒转染， 磷酸化水平的影响。实验分组： EGF刺激0min、5min、1 P．ERK蛋白的表达。 7 MTT比色分析法检测Caveolin．1对乳腺癌细胞增殖的影响 siRNA质粒转染， Lipofectamine2000进行Caveolin．1pcDNA或Caveolin．1 l转染 MDA．MB．436细胞分为Caveolin．1siRNA转染组和阴性对照Shut 检测乳腺癌细胞的增殖水平。 结果： 1 不同乳腺癌细胞的侵袭能力比较 J图像分析系统读取条带面积、宽度和灰度值进行结