植物的细胞培养3.pdfVIP

第四章植物细胞培养 本章主要内容 单细胞的分离与培养 悬浮细胞培养 植物细胞培养的应用 第一节、单细胞的分离与培养 一、分离单细胞的方法 1、物理方法 2、化学方法 3、酶法 1、物理方法 将疏松的愈伤组织放入液体培养基中，经摇 床不断振动，使细胞分散。若向细胞悬浮液中吹 入脉冲压缩气体，细胞分散的更好 。 2、化学方法 是在细胞悬浮培养中加入草酸盐 （能结合细 胞间质中果胶钙的钙离子 ）、秋水仙素 （0.1mmol/L ）或2,4-D或水解乳蛋白 （对细胞分 散有一定的作用）。 3、酶法 利用果胶酶和纤维素酶使细胞分离。 二、单细胞的培养方法 平板培养 看护培养 液体浅层培养 微室培养（微滴培养） 1、平板培养 定义： 将一定量细胞接种到或混合到装有 一薄层固体培养基的培养皿内进行培养 的方法。 技术要点： 单细胞悬浮液的制备：先过滤细胞悬浮 液，去掉全部组织块和大的细胞团，获得 含单细胞或4-6个的细胞团的悬浮液 调节细胞密度； 固体培养基的制备； 接种细胞：把单细胞悬浮液转移到琼脂 平板上，铺成大约1mm 的薄层，然后观察 细胞植板率。 植板率：它以能长出细胞团的单细胞在接 种单细胞中所占的比例来表示。 形成的细胞团数 植板率(％)＝ ×100％ 接种的细胞数 优点：便于定点观察； 缺点：通气性较差。 2、看护培养 • 1953年Muir创立； • 定义：是指用一块活跃生长的愈伤组织来 看护单个细胞，使其持续分裂和增殖的一 种培养方法； • 具体方法：将单个细胞接种于滤纸上，再 置于愈伤组织上培养。 优点： 简便、成功率高 缺点： 不能在显微镜 下直接观察 此法适用于难于培养的植物种类 3、液体浅层培养 技术：先将细胞制成一定密度的细胞悬浮液，用吸 管将悬浮液移到培养皿中形成浅层，一般1mm左 右，石蜡膜封口，静置培养。 优点：、培养物与空气接触面大，通气性好； 、细胞代谢产物容易扩散，不会造成有害 物质的危害； 、继代培养方便、便于观察。 缺点：由于细胞可以游动，不能进行定点观察 4、 优点：可以连续观察细胞的分化和发育； 缺点：通气性差，水分难保持，pH易变动。 5 、悬浮细胞培养： 将细胞接种于液体培养基中培养。 （单独讲解） 第二节、悬浮细胞培养 悬浮培养(suspension culture): 是指将单个游离细胞或小细胞团 在液体培养基中进行培养增殖的技 术。 一、悬浮培养的过程： 二、悬浮培养的优点： 一是增加培养细胞与培养液的接触面，改善 营养供应； 二是在振荡条件下可避免细胞代谢产生的有 害物质在局部积累而对细胞自身产生毒害； 三是振荡培养可以适当改善气体的交换； 三、悬浮培养