CDC25B及14-3-3σ在肾癌中作用的相关研究.pdf

·中文论著摘要· CDC25B和14．3．30在肾癌中作用的相关研究 ·■Jk‘!， 刖 蟊 肾癌中绝大多数为肾透明细胞癌，根治性手术切除是肾癌最有效的治疗方 法，晚期肾癌的治疗一般不推荐手术切除，而且肾癌对放疗和化疗均不敏感，因 此近年基因治疗成了研究的新方向，如果能找到新的癌基因和抑癌基因，并作为 新的治疗靶点应用于临床，将有望对肾癌的诊断及治疗提供帮助。CDC25B是 CDC25家族中重要的成员之一，是细胞有丝分裂的激活剂，可以加速细胞分裂。 目前认为，CDC25B所编码基因是一种新的癌基因，过量的CDC25B可促进肿瘤的 生长和细胞的恶性转化。由于CDC25B在细胞有丝分裂中的重要作用，且与多种 肿瘤有着密切关系，所以成为目前研究的热点。现已经证明CDC25B在人类多种 肿瘤中都有过度表达，其中包括：前列腺癌、食管鳞癌、乳腺癌、结肠癌、胰腺癌、 头颈部癌、胃癌、非小细胞肺癌、甲状腺肿瘤、神经母细胞瘤和子宫内膜癌。在 肾癌中尚未有相关检测。14．3．3蛋白家族是真核生物细胞中一类含量丰富的高度 保守的蛋白质，目前14．3．3蛋白与癌症相关的主要证据来源于14．3．30，14．3．30 的表达水平在各种各样的转染细胞系以及乳腺癌、胃癌、肝癌中都有显著下降， 这种表达水平的下降主要由于14．3．36的启动子被甲基化。研究表明，CDC25B蛋 白丝氨酸磷酸化后，可以成为l钙．30的一个蛋白结合点，14。-3a蛋白通过与 和NES协同，来调控CDC25B的动态核浆穿梭转运及其亚细胞定位，从而影响细胞 周期进程。研究表明，CDC25B是14-3．30蛋白的可能的作用底物。 目 的 本项目通过肾透明细胞癌组织和细胞中CDC25B和14．3．30蛋白作用及相互 作用的研究，揭示这两个蛋白在肾透明细胞癌细胞增殖、凋亡和侵袭力过程中发 挥的重要作用，进一步来指导临床上肾癌的诊断与治疗。 l 实验方法 l、检测不同临床病理分期的肾癌组织中CDC25B和14．3．30蛋白 表达和活性。 从临床病例中选取术后病理回报为I、II、III级肾癌组织各30例通过免疫 组化、Western 旁组织作为对照组。 胞中的表达。 (1)Western 胞中的表达。 (2)Western 中的表达。 l4．3．30shRNA。 孵箱内培养至对数生长期。用0．25％胰酶消化并调节细胞浓度以每孔106个细胞接 shRNA组并设 种于6孔板中。实验分为CDC25BshRNA、14．3．30shRNA、control 步骤参照脂质体说明书进行。转染48h后进行后续操作。 4、检测转染后的肾癌细胞增殖、凋亡和侵袭力的改变。 (1)M订法检测细胞增殖能力； (2)AnnexinV-FITC／PI．FCM实验来检测肾癌细胞的凋亡； (3)Transwell检测肾癌细胞侵袭力。 2 5、Western 的表达。 实验结果 1、CDC25B蛋白在各组中的表达及其与肾透明细胞癌的关系 (1)所有组织中均有CDC25B蛋白的表达，肾透明细胞癌组织中呈高水平 表达，并且肾癌各病理分级间的表达亦有差异，从I级蛩lIII级随着肿瘤的分化程 度降低而表达呈逐渐增加的趋势。 (2)CDC25B蛋白在肾透明细胞癌组织中各临床分期中的表达也有显著差 异，有统计学意义(P0．05)。 2、14．3．3O蛋白在各组中的表达及其与肾透明细胞癌的关系 (1)所有组织中均有14．3．30蛋白的表达，肾透明细胞癌组织中呈低水平表 达，并且肾癌各病理分级『白J的表达亦有差异，从I级至lJlII级随着肿瘤的分化程度 降低而表达呈逐渐减少的趋势。14．3．30在I级肾癌组织与癌旁正常肾组织相比无 显著差异，无统计学意义。 和T3相比有显著差异，有统计学意义(尸O．05)。