平邑甜茶新根扩展蛋白基因MhEXP1的cDNA全序列-中国农业科学.PDF

中国农业科学 2008,41(5):1548-1553 Scientia Agricultura Sinica 平邑甜茶新根扩展蛋白基因 MhEXP1 的cDNA全序列克隆及表达 孙旭东，杨洪强，魏绍冲，徐慧妮，张鑫荣，段凯旋 （山东农业大学园艺科学与工程学院，山东泰安 271018 ） 摘要：【目的】对平邑甜茶[Malus hupehensis （Pamp ）Rehd. var pinyiensis Jiang]新根扩展蛋白基因进 行克隆和表达分析，为揭示扩展蛋白在平邑甜茶根系生长发育中的功能打下基础。【方法】利用RT-PCR结合RACE 技术克隆扩展蛋白同源基因，并通过 Northern 杂交研究其在不同器官中的表达情况及吲哚丁酸（IBA）的处理效 应。【结果】成功地从平邑甜茶白色新根中获得了一个全长的扩展蛋白基因，命名为MhEXP1，GenBank 登录号为 DQ538346。MhEXP1 cDNA全长 1 111 bp，含有771 bp的完整开放阅读框，编码257个氨基酸，预测分子量和等电 点分别为27.8kD和8.9。序列分析表明，MhEXP1具有扩展蛋白的典型结构，即氨基酸序列N端有８个半胱氨酸残 基，1 个组氨酸（His-Phe-Asp，HFD）域，C 末端存在 4 个保守的色氨酸残基。Northern 杂交表明，该基因在平 邑甜茶叶片中表达量很低，但在新根中大量表达并受IBA诱导，且随着IBA处理时间的延长表达量逐渐增加。【结 论】成功地从平邑甜茶中克隆了一个全长的扩展蛋白基因 MhEXP1，该基因在叶片中表达量很低但在新根中大量表 达，并受IBA 诱导；MhEXP1 参与IBA调节的平邑甜茶根系生长发育。 关键词：平邑甜茶；扩展蛋白；cDNA克隆；序列分析及表达；吲哚丁酸 Cloning and Expression of a Full-length cDNA of Expansin Gene from New Root of Malus hupehensis Rehd. SUN Xu-dong, YANG Hong-qiang, WEI Shao-chong, XU Hui-ni, ZHANG Xin-rong, DUAN Kai-xuan (College of Horticultural Science and Engineering, Shandong Agricultural University, Tai’an 271018, Shandong) Abstract: 【Objective 】 The aim of this research is to clone and investigate the expression of the expansin gene from new root of Malus hupehensis (Pamp) Rehd. var pinyiensis Jiang, which will be helpful to study the action of expansin gene in root development. 【Method 】 With the RT-PCR and RACE methods, a full length cDNA sequence of expansin gene was cloned in root of Malus hupehensis (Pamp) Rehd. The expression of expansin gene was analyzed by Northern blot. 【Result 】 Sequencing and structural analysis showed that the full-length of MhEXP1 consisted of 1 111 bp with an open reading frame of 771 bp that could code for a protein of 257 amino acids. The predicted MW and