DNA拓扑异构酶-Ⅱα对肿瘤干细胞在胶质母细胞瘤增殖机制中作用的探究.pdfVIP

·中文论著摘要· CI对肿瘤干细胞在胶质母细胞瘤增 DNA拓扑异构酶一II 殖机制中作用的研究 目 的 多形性胶质母细胞瘤(glioblastomamultiforme，GBM)是最常见的恶性程度最 高的颅内原发性肿瘤，虽采用各种手段综合治疗，但疗效仍不理想。肿瘤干细胞 (cancclstem cells，CSCs)是指存在于肿瘤当中具有干细胞特性的一组细胞集群， 在肿瘤发生增殖过程中起关键作用。本研究拟在已成功分离鉴定GBM的CSCs 及对增殖相关因子DNA拓扑异构酶一II a(Topoisomerase-IIa，Topo—110【)与GBM PCR stem blot及Real．time cells，non．CSCs)两种细胞，进行体外培养；应用Westem a 等分子生物学手段研究Topo．IIQ的表达差异；应用RNA干扰技术沉默Topo．II a对CSCs增殖、凋亡等生物学特性的影响；进一步应用 的表达，研究Topo—II a抑制剂进行干预，研究细胞增殖及细胞凋亡信号传导通路的变化，明确 Topo．II a及其抑制剂对CSCs在肿瘤增殖过程中作用的影响及机制。本项研究不 Topo．II 仅能在分子水平上阐明GBM的发病机理，还将为GBM的治疗提供重要的理论和 实验依据。 方法 选购人脑胶质母细胞瘤U87MG细胞系模型进行体外培养，应用含生长因子 blot及Real．time PCR法检测CSCs及non-CSCs中Topo—110c的表达差异；设计并 合成了Topo．II a 表达沉默对CSCs的增殖能力、凋亡情况和细胞周期等生物学性状的影响，进一 0【在脑胶质瘤发生机制中的作用。 步了解Topo．11 情况和细胞凋亡情况；进一步应用Western 0【抑制剂对CSCs blot法检测Topo．11 Topo-II伐及其抑制剂对CSCs在肿瘤增殖过程中的作用及影响机制。 结 果 1、人脑胶质母细胞瘤U87MG细胞系的培养及CSCs的分离与鉴定 胞培养基培养1—2周，成功分离出细胞球细胞(neurospherecells，NCs)，进一步通 过CDl33染色证实NCs阳性染色率明显高于非细胞球细胞(non．sphereforming cells，NSFCs)；将NCs打散进行单细胞培养并诱导分化证实其具有多向分化能力； 从而证实了NCs具有能分化成GBM并使之呈现细胞多样性的特点，具备CSCs 的特性。 2、Topo．IIa在CSCs和non．CSCs中的表达 应用Real．timePCR和Western a在CSCs中的表达较 blot法验证Topo．II non．CSCs中显著升高(尸O．05)。 3、特异性siRNA合成及转染 q基因特异性的siRNA并转染CSCs，通过 成功地设计并合成了Topo．II Real-time PCR和Western Q基因低表达的CSCs模型。结 blot验证得到了Top0．II 果发现转染siRNA．Topo．110【的细胞增殖能力显著