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谱柱常见问题解答 FAQs for column users By CSD AEs 1.液相色谱柱柱压升高问题 成柱压升高的可能原因有很多。一般是由于色谱柱筛板或柱头发生了堵塞， 成流动相阻 力加大所引起。当然色谱系统其他部分发生堵塞，也可能表现为柱压 （系统压力）升高。所 以在发现系统压力升高时，可首先使用两通短接色谱柱观察相同条件下系统本压是否正常， 排除压力升高为系统其他部分造成。 † 色谱柱筛板堵塞，这往往是由于流动相没有过滤，或虽已过滤但滤膜孔径过大或滤片损 坏，使固体杂 滞留在筛板上 成的。可采用反冲的方法去除堵塞物。对于5 或3.5um 填料的色谱柱，建议采用 0.45um 膜厚过滤样品，1.8um 填料的色谱柱，请采用 0.2um 膜厚过滤样品。 n 同样类似堵塞也会发生于排气阀过滤芯、在线过滤器和保护柱，这时建议更换滤芯， 在线过滤器内的筛板或保护柱内的柱芯。 † 非特异性吸附 当部分组分在柱子上有较强的非特异性吸附，且当前所用的流动相难以 将它们洗脱时，强保留组分的累积则会 成阻力增大和压力升高。可使用适当的溶剂冲 洗以除去吸附物 。 † 样品的沉淀 当样品所用的溶剂与流动相不一致时，样品进入柱中时有可能因溶解度降 低而沉淀出来， 成压力升高。此时建议使用对样品有较高溶解度的溶剂冲洗。 † 盐晶体的析出 使用较高浓度的缓冲液或添加有缓冲液的流动相后，如果冲洗不彻底， 缓冲液中的无机盐成分可能会残留在体系之中。它们会因在新流动相体系中溶解度降低 而析出，造成流动相阻力加大，压力升高。 † 更换流动相时置换不彻底 当改换流动相体系时，不彻底的更换使不同性 、互不相溶 的流动相 在一个体系中，也会 成压力升高。可使用混溶的溶剂（异丙醇）彻底冲洗。 备注： 安捷伦液相色谱柱冲洗建议 反相色谱柱 用以下溶剂至少各25mL 冲洗色谱柱(分析柱) 不含缓冲盐的流动相 100% 甲醇 100%乙腈 75%乙腈+25%异丙醇 100%异丙醇 100%二氯甲烷 * 100% 己烷* *若使用己烷或二氯甲烷冲洗色谱柱, 则在重新使用反相流动相以前, 必须用异丙醇冲洗色 谱柱 !!! 正相色谱柱 用以下溶剂至少各50mL 冲洗色谱柱(分析柱) 50% 甲醇+50%三氯甲烷 100%乙酸乙酯 除有特殊说明外，安捷伦的液相色谱柱在柱头发生堵塞时可以反冲。 2.液相色谱柱保留时间变化 保留时间不重现可能由多种因素引起，通常还会影响到峰面积的重现性，建议检查以下几个 方面： † 确认流动相是新鲜配制的，比例没有错误。比如一些挥发性的溶液，如乙酸，最好及时 更换。 † 确认色谱条件在色谱柱使用范围之内,如pH 范围、温度、压力。 † 仔细观察柱前压的变化，如果压力稳定，就可以判断泵的系统没有问题；如果是压力不 稳定，一定会影响保留时间，这种状况通常是由于泵头里有气泡 成的。请将流动相仔 细脱气，并排出泵内气泡。 † 观察色谱峰形、柱效变化情况，确认色谱柱是否被污染，如果确定色谱柱污染，可尝试 使用适当溶剂冲洗。 † 如果同时伴有色谱柱柱压升高，解决方法请参见“液相色谱柱柱压升高”部份。 † 如果使用梯度洗脱方法，请确认平衡时间足够长。流动相中使用离子对试剂 （烷基磺酸 钠等）或固定相为正相硅胶等，往往需要更长的平衡时间。 † 确认样品是否过载，减少进样量 （进原进样量的10%确认）。 † 组分在色谱柱中保留不够。调整色谱条件，使样品在柱上适当保留。 3.气相色谱峰拖尾、响应低甚至不出峰的主要原因 A) 系统污染、惰性下降 系统惰性不好对活性组分峰形及响应的影响尤为明显。建议选用惰性优异的低流失色谱 柱和色谱耗件，如去活的衬管。如果系统已经被污染，应及时对进样口和检测器进行维护。 恢复被污染色谱柱的方法主要有： 将进样口端截去0.5~1 米，根据样品来源做进一步的判断，如果是半挥发污染物， 还可以进一步考虑对色谱柱进行老化。 污染严重时可截去更长或用溶剂彻底清洗色谱柱（必需是交联键合固定相） B) 色谱柱安装不正确或系统其他部位 在死体积 毛细管柱在进样口和检测器的安装位置不当将影响峰形，请严格按照仪器的使用说明正 确安装色谱柱。其他与