HO-1,NADPH氧化酶在动脉粥样硬化性肾动脉狭窄肾组织中表达和药物干预.pdf

目 录 1 HO-1，NADPH 氧化酶在动脉粥样硬化性肾动脉狭窄肾组织 中的表达及药物干预„„„„„„„„„„„„„„„„1 1.1 中文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„1 1.2 英文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„3 1.3 前言„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„5 1.4 材料与方法„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„7 1.5 结果„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„12 1.6 讨论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„24 1.7 结论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„30 1.8 参考文献„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„31 1.9 英汉缩略词对照表„„„„„„„„„„„„„„„„„35 2 致谢„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„36 血红素加氧酶-1 与肾功能及血压的调节 （综述） 3 „„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„39 HO-1，NADPH 氧化酶在动脉粥样硬化性肾动脉狭窄肾组织中 表达及药物干预 摘 要 目的：很多疾病都可以造成肾动脉狭窄动脉狭窄，其中最常见的原因是 肌纤维发育不良（FMD ）和动脉粥样硬化性肾动脉狭窄（ARAS ）。与FMD 相比，ARAS 更能引起肾脏损伤。在我国，ARAS 已成为引起肾动脉狭 窄的最主要的病因。近几年研究发现，一些抗高血压药物在降低血压的 同时，也具有肾保护作用，但其具体的保护机制是什么，现在还不是很 清楚。ARAS 可通过多种途径导致肾功能损伤，其中氧化应激成为几年 研究的主要途径，而血红素加氧酶-1 （HO-1）具有抗氧化功能，且已有 研究表明其具有一定的肾脏保护作用。在很多肾脏损伤模型中，HO-1 可 被一定的诱导因素诱导表达，起到肾保护作用，但不同降压药包括直接 肾素抑制剂，钙拮抗剂能否诱导 HO- 1 在动脉粥样硬化合并肾动脉狭窄 模型肾脏中表达，在国内外还罕有相关的报道。为此，本实验通过采用 夹毕单侧肾动脉，并联合高脂饲养及注射 VitD3 建立动脉粥样硬化合并 肾动脉狭窄动物模型,通过测定夹毕侧肾脏中HO-1 和NADPH 氧化酶的 表达情况来探索不同降压药（直接肾素抑制剂，钙拮抗剂）对肾脏的保 护作用及可能的机制，为临床能更有效的治疗肾动脉狭窄所致的肾损伤 提供理论依据和策略。 方法：（1）.动物模型的建立：将36 只雄性的SD 大鼠随机分为二肾 一夹（Two Kidney One Clip,2K1C ）组和对照组，2K1C 组采用平行针 灸针缩窄法造成肾动脉狭窄，对照组只暴露肾动脉，不做狭窄。各组大 鼠均予以注射VitD350 万IU/kg 并高脂饲养十周建立AS 合并肾动脉狭 窄动物模型。（2 ）直接肾素抑制剂和钙拮抗剂对肾动脉狭窄性大鼠肾脏 的保护作用的研究：饲养十周后，将对照组和满足实验条件的2K1C 组 大鼠分别随机分组并给与干预措施：生理盐水组，阿利吉仑组及苯磺酸 氨氯地平组,干预四周后处理大鼠，分别进行一下实验：1）游离并切取 SD 大鼠狭窄侧肾脏，一部分石蜡包埋做PAS 染色及免疫组化，一部分 -70 ℃冷冻保存。2 ）免疫组化法检测HO-1 和p47-phox(NADPH 氧化酶 的一种亚型) 的表达：取肾脏石蜡切片，采用 SP 法分别检测 HO-1 和 p47-phox 在肾脏中的表达变化。图像采集后用Image-pro-plus 6.0 软件 分析。（3 ）RT-PCR 法检测HO-1 和p47-phox 的表达：取冷冻保存的肾 脏组织经提取总RNA ，逆转录，扩增，电泳后，用Quangtity one 软件 分析. 结果：(1)免疫组化结果：比较相同手术造模方式的实验大鼠肾脏组 织中的HO-1, p47-phox 的表达的光密度值（IOD ）。1）肾脏组织中HO-1 的表达：2K1C 阿利吉仑组和氨氯地平组与生理盐水组间及阿利吉仑组 与氨氯地平组间的差异均有显著性（P0.05 ）2 ）肾脏组织中ph-47