蛋白药物用于药物涂层支架的的分析研究.pdfVIP

蛋白药物用于药物涂层支架的研究 摘 要 以死亡率计，冠状动脉粥样硬化为代表的心血管疾病至今仍是人类 健康的第一杀手。在冠状动脉腔内植入支架是对于该类疾病进行非手术 治疗的主要手段，而将药物载于支架在病变部位缓慢释放则是避免支架 植入后血管再狭窄的必要措施。目前临床上用于药物涂层支架的多为化 学小分子药物，其在抑制平滑肌增殖的同时，也抑制内皮细胞的生长， 造成再内皮化大幅度延迟，以及急性或亚急性血栓等问题，使得药物涂 层支架的应用存在着潜在的危险。蛋白药物因其生物特异性，有可能选 择性地抑制平滑肌或促长血管内皮，引起了科学家的关注和研究投入， 报道了一些有前景的蛋白药物，为药物涂层支架的研究提出了一些新的 思路，显示了这一领域的技术可行性。但对于持有脆弱三级结构的蛋白 药物来说，将蛋白大分子药物固定化在支架表面并且缓慢地释放于治疗 部位在技术上具有一定的难度和挑战。 本研究提供了一个可以安全有效地将足够剂量的蛋白药物均匀地 组合于高分子涂层的基质中的方法，即将我们自行开发的新型材料体 系：稳定的水相-水相乳液技术及其基础上制备的蛋白质-多糖玻璃体应 用于支架涂层上，在有效保护蛋白活性的同时实现蛋白的缓控释，着眼 于从制剂工艺的角度解决再狭窄问题。 本研究是以牛血清白蛋白为模型，通过稳定的水相-水相乳液技术 将其制备成多糖玻璃体颗粒，并将多糖玻璃体颗粒分散于聚乳酸的二氯 甲烷和乙酸乙酯（1：1）溶液中，喷涂于316L 不锈钢支架表面制成蛋 白涂层支架，用SEC-HPLC 比较了蛋白涂层支架制备前后蛋白的聚集情 况，并用扫描电镜等对蛋白涂层支架表面进行了表征。将制备的蛋白涂 层支架在水浴摇床以37°C 磷酸盐缓冲液（PBS ）为介质进行体外释放 动力学研究，按规定的时间间隔取样后用 MicroBCA 试剂盒测定，并考 察了控释层厚度，高分子涂层（PLA 、PLGA ），蛋白葡聚糖比例，蛋白 种类等因素对蛋白体外释放的影响。 在对蛋白涂层支架条件有所把握的基础上，本文考察了将具有促血 管生成作用的促红细胞生成素（EPO ）应用于心脏涂层支架的可行性， 建立了EPO 效价检测方法，比较了EPO 涂层前后蛋白聚集情况，并采 用效价检测方法测定了EPO 体外释放动力学。 结果表明蛋白涂层支架在电镜观察下外观圆整，表面光滑，制剂过 程中未产生蛋白聚集，且蛋白担载量高，能从涂层中缓慢释放达 50 天 以上。蛋白释放速度随着控释层的厚度增加而减慢。PLGA 涂层的释放 速度明显较PLA 涂层快。制备多糖玻璃体颗粒时葡聚糖/蛋白的比例越 高，蛋白释放的突释越小。以该法制备的蛋白涂层支架，蛋白的性质不 同对释放行为影响不大。EPO 涂层支架亦能保护EPO 在涂层和释放过程 中的活性，且实现缓释。 稳定的水相-水相乳液技术及其基础上制备的蛋白多糖玻璃体颗粒 应用于心脏支架涂层上，能在有效保护蛋白构象的同时实现蛋白的缓 释，为具有抗再狭窄活性蛋白应用于心脏支架提供了技术平台。 关键词：蛋白，稳定的水相－水相乳液，蛋白多糖玻璃体颗粒，蛋白涂 层支架，促红细胞生成素 APPLICATION OF PROTEINS ON DRUG-ELUTING STENT ABSTRACT Drug-eluting stents have widely been accepted and applied in clinical treatment of atherosclerotic stenosis for its effectiveness in reducing incidence of restenosis after percutaneous coronary intervention. However, the chemical ingredients loaded on the drug-eluting stents currently used in clinics are less selective, thus they do not only suppress the proliferation of smooth muscle cell but aslo inhibit re-endothelialisation of the wounded