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基孔肯雅热预防控制技术指南（试行）5ml（非抗凝血），一般情况下，发病后2日内血清可用于病毒分离，发病后5日内血清可用于CHIKV核酸检测和血清学检测。 恢复期血清：静脉血2～5ml（非抗凝血），无菌采集，与急性期血清间隔时间为2～3周。 采血后，低温保存并尽快运送至实验室分离血清，以便及时进行血清学或病原学检测。 不能及时检测的血清可置于-70℃保存，尽量避免反复冻融。 （二）伊蚊。 在本病暴发或流行期间，采集家庭内或外环境中伊蚊成蚊、幼虫，用于病原学检测。 二、标本的运输 按照卫生部《人间传染的病原微生物名录》的规定，CHIKV的危害程度属第二类病原微生物，血清和伊蚊标本应采用A类包装（编号：UN 2814），干冰运输。 三、实验室特异性检测方法 目前，基孔肯雅热的实验室检测方法主要有3种：病毒分离、核酸检测和血清学检测。 按照卫生部《人间传染的病原微生物名录》的规定，病毒分离应在BSL－3级实验室中进行，灭活血清、伊蚊冻存标本的核酸和血清学检测可在BSL－2级实验室中。 （一）血清学检测方法。 1．特异性IgM检测 目前较多采用的方法有：IgM捕获ELISA法（MacELISA）、间接ELISA法和IgM捕获法胶体金标记（或其他标记）免疫层析试纸条等。 一般情况下，IgM抗体发病后1天开始出现，发病后5天多数患者呈阳性。 2．特异性IgG检测（急性期、恢复期双份血清） 目前较多采用的方法有：间接ELISA法、免疫荧光法和胶体金标记（或其他标记）免疫层析试纸条等。 一般情况下，IgG抗体发病后2天开始出现，发病后5天多数患者呈阳性。 3．意义 （1）IgM阳性结果，表明患者新近CHIKV感染，用于基孔肯雅热早期诊断。 （2）IgG阳性结果，表明曾受到CHIKV感染；恢复期血清抗体滴度比急性期抗体滴度有4倍或4倍以上升高则可确诊。 （二）病原学检测方法。 1．方法 （1）CHIKV核酸检测 可采用RT-PCR和Real-time PCR等核酸扩增的方法检测。一般发病后4日内在多数患者的血清中可检测到病毒核酸。 冻存伊蚊标本也可进行CHIKV核酸检测。 （2）病毒分离 采用Vero、C6/36、BHK-21和HeLa等细胞或其他敏感细胞进行。一般情况下，用于病毒分离的血清标本应在发病2日内采集。 冻存伊蚊标本也可进行CHIKV分离。 2．意义 患者血清中分离到CHIKV和/或排除PCR污染后，扩增到特异性条带、测序后可确诊CHIKV感染。 附件2 基孔肯雅热流行病学调查方案 为指导疾病预防控制专业人员做好基孔肯雅热疫情的流行病学调查工作，制定本方案。 一、调查目的 （一）通过流行病学调查，搜索未报告的病例，追溯可能的传染源和感染地点； （二）调查周围环境的媒介伊蚊情况，评估发生基孔肯雅本地传播的风险。 二、调查对象 （一）基孔肯雅热疑似病例、临床诊断病例、实验室确诊病例； （二）病人发病后境内逗留地点的接触者和共同暴露者。 三、调查内容和方法 基孔肯雅热病例调查的重点在于查明患者可疑的传染来源和感染地，判断患者为输入病例还是本地感染病例，调查患者病毒血症期在境内的停留地点，搜索未报告的病例，指导后续的媒介控制和疫情处理工作。 对于国（境）外输入的病例，重点调查病例病毒血症期在国内逗留情况，搜索逗留地点的未报告病例，以及调查患者病毒血症期逗留地的蚊媒密度，评估疫情扩散的风险。 对于从我国其他省区输入的病例，除调查患者病毒血症期间在本地的逗留情况、搜索病例和调查蚊媒密度外，应将病例情况通报发病前旅行目的地省份的疾控部门，通知其对病例可疑的感染地点进行调查，搜索未报告病例并调查蚊媒密度和伊蚊带毒情况。 对于本地感染的病例，除调查患者病毒血症期间的活动情况、搜索病例和调查蚊媒密度外，还要重点调查病例发病前的详细活动情况，找出可能的感染地点，搜索未报告病例，采取措施控制蚊媒密度。 （一）个案调查和标本的采集。 接到基孔肯雅热病例报告后，疾控人员应立即开展流行病学个案调查。调查内容包括：病例的基本情况、发病前旅行史和暴露史、就诊情况、临床表现、实验室检查、诊断和转归情况、居住地及发病后逗留地点、共同暴露者情况等（填写附表“基孔肯雅热个案调查表”），并采集相关标本进行检测（见《基孔肯雅热实验室检测方案（试行）》）。 1. 临床资料 通过查阅病历及化验记录、询问医生及病人、病人家属等方法，详细了解病例的就诊经过、临床表现、实验室检查结果等情况。 2. 病例家庭及家居环境情况 通过询问及现场观察，了解病例家庭人员情况、家居环境、孳生蚊虫的可疑容器情况等。 3. 病例发病前暴露地点和发病后活动范围 (1) 发病前2周内的活动情况：旅行或活动地点、蚊虫叮咬史，找出可疑感染地点，推断该病例为输入性还是本地感染。 (2) 发病