STOX1在子痫前期胎盘中的表达和意义.pdfVIP

·中文论著摘要· STOXl在子痫前期胎盘中的表达及意义 目 的 子痫前期是妊娠期特有的疾病，是导致围产期母儿死亡的主要原因。子痫前 期的病因目前尚不能明确，但多数学者认为，孕早期绒毛外滋养细胞的侵袭不良， box 1)是由Van 造成缺陷性胎盘的形成是其发病的根本原因。STOXl(Storkhead Dijk等人在染色体10q22上发现的，存在于孕早期绒毛外滋养细胞中，具有调节 绒毛外滋养细胞侵袭的功能。研究STOXl在子痛前期和正常胎盘组织中蛋白和 mRNA表达水平的变化，探讨其与子痫前期发病之间的关系，有助于为子痫前期 的临床防治提供新思路。 方 法 一、临床资料 选取2010年2月1011年2月在中国医科大学附属第一医院产科病房住院 患者中，经孕产妇及家属同意(已签署知情同意书)的子痫前期患者胎盘20例作 为实验组。子痫前期诊断标准参照乐杰主编第七版《妇产科学》(妊娠20周以后 院J下常妊娠胎盘20例作为对照组。研究对象均为剖宫产分娩、单胎、。初产妇。所 有病例均无其他产科并发症及内外科合并症。 二、标本采集与处理 胎盘娩出后立即以脐带为中心取大小约l×1×1cm母体面中央区组织4块，避 开钙化、机化及出血的胎盘组织块。生理毪水充分清洗。其中l块10％福尔马林 液固定，常规石蜡包埋，供免疫组织化学用。其余3块冻存管内封存后立即投入 PCR检测用。 液氮中保存，供Westernblot及Real．time 三、实验方法 (一)免疫组织化学检测正常妊娠与子痫前期胎盘中STOXl的表 达 6．0柠檬酸缓冲液1210C 石蜡切片常规脱蜡、水化，3％过氧化氢室温孵育，pH 孵育，DAB显色，脱水、透明，封片后光学显微镜下观察结果。 (二)免疫印迹检测STOXl的蛋白表达 标本置于EP管中加入蛋白裂解液及蛋白酶抑制剂，机械匀浆、离心后取上清 液考马氏亮蓝R250染色法测总蛋白浓度。煮样后电泳、转膜，5％脱脂牛奶封闭， 果。 (三)实时定量聚合酶链反应检测STOXImRNA的表达水平 采用Trizol法提取并纯化总RNA，根据逆转录和扩增试剂盒进行逆转录和扩 5s，600C 增。实时定量PCR反应条件：950C30s预变性；950C 30s，40个循环， ． 所有反应均设立复孔。采用△△CT法计算mRNA的相对含量。 四、统计学处理 采用SPSSl9．0统计软件，计量资料用X_-LS表示，两样本均数比较采用t检 验，阳性率的比较采用卡方检验，以P0．05作为差异性检验水准。 姑 田 =口7卜 1、免疫组化结果 阳性细胞率法测定，STOXl蛋白在正常胎盘组织中以合体滋养细胞胞核表达 为主，伴有少量胞浆表达，占20％(4／20)；而在子痫前期胎盘组织中胞核胞浆均 有明显表达，其中胞浆表达占85％(17／20)，两者胞浆表达有显著统计学差异(卡 2 方检验，尸o．01)。 平均光密度值法测定，细胞浆内出现深棕色颗粒为阳性细胞。子痫前期胎盘 中STOXl的平均光密度值(0．484土0．167)高于正常胎盘(O．121士0．011)，两者间 有明显统计学差异(刨．01．P0．01)。 2、Western blot结果 组织中表达O．301士0．118，两者之间有显著统计学差异(t=8．608，P0．01)。 3、Real．time