细菌16s核糖体rna基因检测杰氏棒状杆菌一株.pdfVIP

·２９６ · 中华诊断学电子杂志２０１５年１１月第３卷第４期 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ（Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ Ｅｄｉｔｉｏｎ），Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２０１５，Ｖｏｌ．３，Ｎｏ．４ ·基础研究 · 细菌 １６Ｓ核糖体 ＲＮＡ基因检测 杰氏棒状杆菌一株 崔颖鹏 黄朱亮 【摘要】 目的 探讨通过 １６Ｓ核糖体ＲＮＡ（１６Ｓ ｒＲＮＡ ）基因测序的方法用于临床菌株鉴定。 方 法 以细菌１６ＳｒＲＮＡ基因为靶序列，采用细菌的通用引物Ｐ１、Ｐ２进行ＰＣＲ扩增，同时送到测序公司 测序从而达到鉴定。 结果 待测菌株及 ＡＴＣＣ２５９２３ 阳性对照通过ＰＣＲ得到的扩增片段为 １４６５ｂｐ 左右，待测菌株经测序比对鉴定为一株杰氏棒状杆菌，阳性质控ＡＴＣＣ２５９２３鉴定为一株金黄的葡萄 球菌，阴性对照未出现任何结果。 结论 通过ＰＣＲ检测细菌１６ｓｒＲＮＡ基因可以应用于临床菌株的鉴 定，并且适用一些难以鉴定的细菌。 【关键词】 细菌； ＲＮＡ，核糖体，１６Ｓ； 聚合酶链反应 Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｊｅｉｋｅｉｕｍ ｂｙ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ １６ｓ ｒｉｂｏｓｏｍａｌ ＲＮＡ ｇｅｎｅ Ｃｕｉ Ｙｉｎｇｐｅｎｇ，Ｈｕａｎｇ Ｚｈｕｌｉａｎｇ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌｂｏｒａｔｏｒｙ，ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｓｕｎ Ｙａｔ⁃ｓｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１００８０，Ｃｈｉｎａ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：Ｃｕｉ Ｙｉｎｇｐｅｎｇ，Ｅｍａｉｌ：ｊａｆｅｓｏｎａ７４＠１６３．ｃｏｍ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｄｅｔｅｃｔｃｌｉｎｉｃａｌｓｔｒａｉｎｂｙａｍｐｌｉｆｙｉｎｇ １６ＳｒｉｂｏｓｏｍａｌＲＮＡ（１６ＳｒＲＮＡ）ｇｅｎｅ ｗｉｔｈ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ （ＰＣＲ） ｍｅｔｈｏｄ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １６Ｓ ｒＲＮＡ ｇｅｎｅ ｗａｓ ａｍｐｌｉｆｙｉｅｄ ｂｙ ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ｐｒｉｍｅｒｓＰ１，Ｐ２ｗｉｔｈｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ａｎｄｔｈｅｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎｐｒｏｄｕｃｔｓｗｅｒｅｓｅｑｕｅｎｃｅｄｔｏ ａｃｈｉｅｖｅ ｔｈｅ ＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｗｅｒｅ ａｂｏｕｔ １４６５ｂｐ，ａｎｄ ｔｈｅ ＰＣＲ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｗｅｒｅ ｂｌａｓｔｅｄ ｉｎ ＮＣＢＩ ｗｅｂｔｏａｃｈｉｅｖｅｔｈｅｐｒｏｐｅｒｓｔｒａｉｎｎａｍｅ，ｗｉｔｈｔｈｅｕｓｅｏｆｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄ，ｔｈｅｕｎｋｏｗｎｇｒａｍ⁃ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｂａｃｉｌｌｉ ｓｔｒａｉｎ ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｊｅｉｋｅｉｕｍ ｓｔｒａｉｎ，ＡＴＣＣ２５９２３ ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ ａ ｓｔｒａｉｎ ｏｆ ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ａｎｄ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｗａｓ ａｌｓｏ ｓｐｅｃｉｆｉｃ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ １６ＳｒＲＮＡ ｇｅｎｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ａｓ ｓｔｒａｉｎ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ ｆｏｒ ｓｏｍｅ ｌｅｓｓ ｃｏｍｍｏｎ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｔｒａｉｎｓ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】 Ｂａｃｔｅｒｉａ； ＲＮＡ，１６Ｓ，ｒｉｂｏｓｏｍａｌ； Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ 传统的病原微生物检测的金标准，主要依据形 变区和保守 区组成，具有属或种 的特异性。 态特征和生化反应甚至使用质谱的方法进行鉴定， １６ＳｒＲＮＡ编码基因长度约为１４６５ｂｐ，长度适中，在 但是需要对细菌分离、培养，存在实验条件限制，并 结构与功能上具有高度的保守性，素有“细菌化石” 且采用专用设备对于有些细菌也不一定能给出理想 ［２］ 之称 。 因此，根据以上特性，设计合成通用引物， 的鉴定结果，